待檢紅細胞懸液不宜過(guò)稀或過(guò)濃;
所用的試劑必須在有效期內;
氣溫較高時(shí),為防止標本干涸所致的假陽(yáng)性,可將玻片放入有一濕棉球的平皿中。若室溫過(guò)低,可將玻片置于28℃右右的溫箱中;
注意區分紅細胞的疊連現象與凝集現象。前者滴加生理鹽水1~2滴混勻后,紅細胞即可分散成渾濁狀,而后者則不因此而改變;
利用已知A型和B型紅細胞與一系列稀釋的待檢血清作凝集反應,根據凝集效價(jià)(以出現凝集的最高稀釋度)的高低可作為判斷體液免疫功能的一項指標。多數免疫功能正常的半歲嬰兒,除AB型外,血清中相應的抗A效價(jià)≥1:8,抗B效價(jià)≥1:4。一歲后,凝集效價(jià)也相應提高。
聚凝胺交叉配血試驗的注意事項如下: ①可以用EDTA抗凝之血漿代替血清使用; ②若患者血清(血漿)含肝素,如血液透析患者,須多加4-6滴Polyrene溶液以中和肝素; ③若試劑使用前為低溫C存,請恢復室溫再行操作; ④加做輔助性抗球蛋白試驗,目的是增 加檢測抗-K的敏感性,對檢測其他紅細胞抗體無(wú)幫助; ⑤在冬天室溫極低的情況下,操作交 叉配血試驗,某些患者血清中可能含有冷凝集素,可導致假陽(yáng)性的結果出現。
若有此懷疑, 建議在最后滴入復懸液時(shí),將試管立即置入37°C水浴中,輕輕搖動(dòng)試管混合,并在30秒內 觀(guān)察結果; ⑥離心力所對應轉速為3400rpm。
交叉配血試驗,是指受血者的血清加供血者的紅細胞懸液,供血者的血清加受血者的紅細胞懸液,同時(shí)進(jìn)行凝集試驗。
交叉配血試驗包括主試驗和副試驗兩種。前者用受血者的血清與供血者的紅細胞懸液做試驗,以發(fā)現受血者的血清中是否含有與供血者紅細胞反應的抗體,又稱(chēng)直接配合或主側配合。
后者則用供血者的血清與受血者紅細胞做試驗,以發(fā)現供血者血清中是否有不合抗體,又稱(chēng)間接配合。其目的是驗證供者與受者ABO血型鑒定是否正確,以防止溶血性輸血反應。
此外,也可檢出ABO血型系統的不規則凝集素,以及發(fā)現ABO系統以外的其他血型抗體。交叉配血試驗有多種方式,如鹽水法、膠體介質(zhì)配血法、抗球蛋白法、聚凝胺法等。
輸血時(shí),不僅要鑒定ABO血型和Rh血型,即使輸入同型血,或受血者再次接受同一供血者的血液,都必須做交叉配血試驗。
操作方法:
1、取出3支試管分別標記主、次及對照管測試。
主測管:2113 病人血清2滴 + 獻血者3%~5%血球(洗滌不洗滌均可)52611滴,血球用生理鹽水稀釋
次測管: 獻血者血清2滴 + 病人3%~5%血球(洗滌不洗滌均可)1滴,血球用生理鹽水稀釋
對照管: 2滴陽(yáng)性對照血清 + 獻血者3%~5%血球(洗滌不洗滌均可)1滴,血球用生理鹽水稀釋
2、各加低離子介溶液0.65ml, 輕輕混合均勻,于室溫下,靜置1分鐘
3、滴加2滴凝聚胺溶液,輕輕混合均勻,于室溫下靜置15秒鐘
4、離心,3400轉/10秒鐘,然后把上清夜倒掉,不要倒干,使管底保留大4102約0.1ml的液體
5、測紅血球有無(wú)變成1653凝塊(即凝集反應),如果沒(méi)有凝塊,則版必須重做。權重做后,仍然沒(méi)有凝集現象出現,可能試劑失效,請與代理商或原廠(chǎng)商聯(lián)系
6、加入2滴復懸液,并輕輕混合,觀(guān)察結果。若為凝聚胺引起的非免疫性凝集,應該在1分鐘內散開(kāi);若異體抗體所引起的免疫性凝集,則不會(huì )散開(kāi)
7、倒在玻片上用肉眼或顯微鏡觀(guān)察有無(wú)凝集,如有凝集反應,表示不合,此獻血者的血液不宜給病人使用;如無(wú)凝集反應,表示獻血者的血液適合給病人輸注。
實(shí)驗完畢后將聚凝胺試劑放回冰箱內。
⑴可以用含EDTA之血漿代替血清使用。
⑵若病人血清(血漿)含肝素,如洗腎患者,須多加4—6滴Polyrene溶液以中和肝素。⑶若試劑使用前為低溫貯存,請恢復室溫再行操作。
⑷加做輔助性抗球蛋白試驗,目的是增加檢測抗-K的敏感性,對檢測其他紅細胞抗體無(wú)幫助。 ⑸在冬天室溫極低的情況下,操作交叉配血試驗,某些病人血清中可能含有寒冷凝集素等因素,可導致假陽(yáng)性的結果出現。
若有此懷疑,建議在最后滴入Resuspending時(shí),將試管立即置入37℃水浴中,輕輕搖動(dòng)試管混合,并在30秒內觀(guān)察結果。 ⑹離心力所對應轉速為3400rpm.。
輸血前1、輸血前當晚要有充足的睡眠,精神狀態(tài)良好; 2、輸血前一天和當天2113早晨,不要吃油膩食物; 3、不要空腹輸血,應當吃些清淡的食物,如稀飯、饅頭、面包等。
4,思想上有放松,不要對輸血覺(jué)得有5261負擔。獻血后:1、拔針后前臂伸直后稍上抬,用三個(gè)手指用力按壓針眼10分鐘以上,不要揉搓針,24小時(shí)內勿清洗針眼;2、輸血后1-2天應適當4102休息,勿熬夜或進(jìn)行劇烈運動(dòng),如踢足球、打籃球、跑步或駕車(chē)及高空作業(yè)等;3、少部分人抽1653血后有可能出現疲倦感、嗜睡,這大多是第一次丑血出現的生理反應現象,不必擔心,適當休息可自行恢復; 4、輸血后一兩天內勿暴食暴飲,勿喝酒。
內在平常飲食的基礎上可適當補充些蛋白質(zhì)和水果。5、若針眼處有青紫現象,這是由于當時(shí)止血不好或是血管少量滲血所致,幾天內會(huì )自行吸收,不會(huì )留下痕跡;若青紫面較大,可在獻血二十四小時(shí)后熱敷容即可消除。
6、輸血后注意不要著(zhù)涼,避免感冒。
材料和試劑 診斷用人血型抗A血清、診斷用人血型抗B血清(常在血清中加入不同顏色的染料以示區別,如A型紅色,B型藍色)、生理鹽水、供血者血清、受血者血清、供血者的2%紅細胞懸液、受血者的2%紅細胞懸液。
器具 凹玻片或載玻片、小試管、尖嘴滴管、無(wú)菌刺血針、牙簽、酒精棉球、無(wú)菌干棉球、試管架、顯微鏡、記號筆等。 操作過(guò)程交叉配血1、首先準備好受血者和獻血者的血樣。
2、分別用生理鹽水配好用受血者2·5%的紅細胞鹽水懸液、獻血者2·5%紅細胞鹽水懸液。 3、主側加受血者血清0。
5ml,獻血者紅細胞鹽水懸液0。5ml。
4、次側加獻血者血清0。5ml,受血者紅細胞鹽水懸液0。
5ml。 5、混勻后,根據所用交叉配血方式,如酶技術(shù)配血法,可在37度水浴箱孵育1小時(shí)后,直接觀(guān)察有無(wú)凝集或溶血;若選用鹽水介質(zhì)等方法,則需1000rpm離心1min;或選用一定的速度離心相應的時(shí)間,如聚凝胺試劑提供的轉速和時(shí)間。
結果觀(guān)察 先觀(guān)察上清液的顏色,然后再輕搖試管觀(guān)察有無(wú)紅細胞凝集現象發(fā)生; 結果判定:如試管內紅細胞呈均勻混濁無(wú)顆粒出現即無(wú)凝集,上清液呈正常血清狀顏色為交叉配血試驗相合。如上清液呈紅色即有溶血現象,紅細胞成塊即為凝集現象,為交叉配血試驗不相合。
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