核酸的提取和制備通常還用哪些方法(PCR反應(yīng)模板核酸的提取制備方法是什么)
1.PCR反應(yīng)模板核酸的提取制備方法是什么
異硫氰酸胍提取編輯異硫氰酸胍法提取制備模板核酸此法主要用于RNA的提取.標本為組織細胞及血清等.1.異硫氰酸胍消化液異硫氰酸胍4mol/L檸檬酸鈉（PH7.0）25mmol/L十二烷基肌酸鈉0.5%β巰基乙醇0.1mol/L2.消化方法：用50~100ul細胞懸液及血清，加等體積的異硫氰酸胍消化液振混勻后，或65℃1小時，或室溫放置數(shù)分鐘，然后加1/10體積的3mmol/LpH5.2的醋酸鈉緩沖液，再加等體積的酚：氯仿，用力振搖約10s,10000r/min，離心5min，取上清加等體積異丙醇20℃放置3h后，14000r/min離心15min，沉定用75%冰冷乙醇離心洗滌1~2次，真空干燥，沉淀用TE緩沖液溶解即可用于逆轉(zhuǎn)錄PCR擴增，或放20℃保存。
2.核酸純化試劑的使用方法和注意事項有哪些
使用方法因廠家不同而不同，下面是一氪生物技術(shù)的核酸純化試劑使用方法及注意事項，供參考：
步驟一：使用無水乙醇與純化水配制70%乙醇備用。
步驟二：從2-8℃冰箱中取出磁珠懸浮液，在室溫條件下震蕩混勻，平衡30min。
步驟三：將充分震蕩混勻平衡后的磁珠加入待純化酶反應(yīng)或PCR反應(yīng)產(chǎn)物溶液中。磁珠加入體積分別參考圖1和圖2，若待純化產(chǎn)物體積不足，可用純化水或10mM Tris-HCl(pH8.0)補充至相應(yīng)體積。
步驟四：用移液器反復(fù)吹打10次，將磁珠懸浮液和PCR產(chǎn)物或者酶反應(yīng)物充分混勻，室溫條件下靜置5min。
步驟五：將反應(yīng)板放置在磁力架上，靜置2min，待溶液澄清后將上清吸走，轉(zhuǎn)入廢液桶內(nèi)。
步驟六：向反應(yīng)板中加入200μL新鮮配置的70%的乙醇，室溫靜置30s。靜置結(jié)束后將乙醇吸走，轉(zhuǎn)入廢液桶內(nèi)。操作環(huán)節(jié)不可將反應(yīng)板從磁力分離架上拿下或?qū)⒋胖榇瞪ⅰ?/p>
步驟七：重復(fù)步驟六。
步驟八：保持反應(yīng)板置于磁力架上狀態(tài)，室溫開蓋晾干2min以去除殘存的乙醇。
步驟九：將反應(yīng)板從磁力架上取下來，加入50μL洗脫液，移液器反復(fù)吹打10次混勻，室溫靜置3min。洗脫液加入量根據(jù)實際需要而定，但應(yīng)不少于5μL。
步驟十：將反應(yīng)板重新放置在磁力架上，室溫靜置1min，上清液即純化后的DNA產(chǎn)物。
步驟十一：將上清液轉(zhuǎn)入新的反應(yīng)管或者反應(yīng)板中，供下一步反應(yīng)或檢測使用。
3.要獲取完整核酸需要采取什么措施
在dna的提取過程中防止脫氧核糖核酸酶的水解作用，應(yīng)采取哪些措施
相同點：都能以DNA為模板，從5'向3'進行核苷酸或脫氧核苷酸的聚合反應(yīng)。
不同點
1、作用底物不同。RNA聚合酶底物是NTP;DNA聚合酶底物是dNTP。
2、RNA聚合酶作用不需要引物，而DNA聚合酶作用需要引物。
3、RNA聚合酶本身具有一定的解旋功能，而DNA聚合酶沒有，當(dāng)需要解開雙鏈的時候要解旋酶和拓撲異構(gòu)酶的幫助。
4、RNA聚合酶只具有5'到3'端的聚合酶活性，而DNA聚合酶不僅有5'到3'端的聚合酶活性，還具有3'到5'端的外切酶活性。保證DNA復(fù)制時候校對，所以復(fù)制的忠實性高于轉(zhuǎn)錄的。
5、RNA聚合酶通常作用于轉(zhuǎn)錄過程；DNA聚合酶通常作用于DNA復(fù)制過程
4.提取制備RNA常用的方法有哪幾種,各有何優(yōu)缺點
常見的RNA提取方法有苯酚法、陰離子去污劑法、LiCl一尿素法、改良的Gomez法、異硫氫酸胍法、CTAB法、熱硼酸法及改良熱硼酸法、TRIZOL試劑快速提取法。
RNA提取時，就變性劑的選擇來說，CTAB(CTAB法)比異硫氰酸胍（RIZOL試劑法）和 SDS（改良熱硼酸法）更有效；就CTAB法來說，由于以CTAB為變性劑，同時加入PVP和β一巰基乙醇共同作用變性蛋白、抑制RNase的活性，使用無水乙醇或異丙醇沉淀雜蛋白和總核酸等，然后再選擇性地分離出RNA。
5.DNA的提取方法有多少種
DNA的提取方法有7種：酚抽提法、甲酰胺解聚法、玻璃棒纏繞法、異丙醇bai沉淀法、表面活性劑快速制備法、加熱法快速制du備、堿變性快速制備。
DNA的提取原則
1、保證核酸一級結(jié)構(gòu)的完整性；
2、核酸樣品中不應(yīng)存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子；
3、其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)zhi降低到最低程度；
4、其他核酸分子，如RNA，也應(yīng)盡量去除。
擴展資料
提取daoDNA的注意事項
1、各操作內(nèi)步驟要輕柔，盡量減少DNA的人為降解。
2、注意防止非核酸類成分干擾。
3、要減少DNA的降解，促進DNA與蛋白等的分相及DNA沉淀。
4、提取DNA過程中所用到的試劑和器材容要通過高壓烤干等辦法進行無核酸酶化處理。
5、所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配制。
參考資料來源：百度百科-dna提取
6.在核酸的分離提取和純化過程中,都利用核酸的哪些生物學(xué)特性
核酸（nucleic acid）是遺傳信息的攜帶者，是基因表達的物質(zhì)基礎(chǔ)。無論是進行核酸結(jié)構(gòu)還是功能研究，首先需要對核酸進行分離和純化。核酸樣品質(zhì)量將直接關(guān)系到實驗的成敗。核酸分離、純化原則：1.保持核酸分子一級結(jié)構(gòu)的完整性。因為遺傳信息全部儲存在一級結(jié)構(gòu)之中，核酸的—級結(jié)構(gòu)還決定其高級結(jié)構(gòu)的形式以及和其他生物大分子結(jié)合的方式。2.分離核酸原則：1）溫度不要過高；2）控制pH值范圍（pH值5-9）; 3）保持一定離子強度； 4）減少物理因素對核酸的機械剪切力.
在核酸分離提取中最重要的是要防止核酸的生物降解，細胞內(nèi)或外來的各種核酸酶能消化核酸鏈中的磷酸二酯鍵，破壞核酸一級結(jié)構(gòu)。所用器械和一些試劑需高溫滅菌，提取緩沖液中需加核酸酶抑制劑。
常用的DNA酶抑制劑有1.金屬離子螯合劑：如EDTA-Na2（乙二胺四乙酸二鈉）、8-羥基喹啉。2.陰離于型表面活性劑如SDS，該試劑除對核酸酶有抑制作用外，還能使蛋白質(zhì)變性，并與變性蛋白結(jié)合成帶負電荷的復(fù)合物，該復(fù)合物在高鹽溶液中沉淀。
常用的RNA酶（RNAase）抑制劑有：1.皂土（bentonite ）作用機制：皂土帶負電荷，能吸附RNase，使其失活。2. DEPC（二乙基焦碳酸鹽） （C2H5OCOOCOOC2H5）粘性液體，很強的核酸酶抑制劑。作用機制：與蛋白質(zhì)中His結(jié)合使蛋白變性。
以上答案希望對你有幫助。
7.DNA的提取方法有多少種
DNA的提取方法有7種：酚抽提法、沉淀法、表面活性劑快速制備法、加熱法快速制備、堿變性快速制備。
DNA的提取原則 1、保證核酸一級結(jié)構(gòu)的完整性； 2、核酸樣品中不應(yīng)存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子； 3、其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)降低到最低程度； 4、其他核酸分子，如RNA，也應(yīng)盡量去除。 擴展資料提取DNA的注意事項 1、各操作步驟要輕柔，盡量減少DNA的人為降解。
2、注意防止非核酸類成分干擾。 3、要減少DNA的降解，促進DNA與蛋白等的分相及DNA沉淀。
4、提取DNA過程中所用到的試劑和器材要通過高壓烤干等辦法進行無核酸酶化處理。 5、所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配制。
參考資料來源：百度百科-dna提取。
8.提取DNA的方法有哪些
DNA提取的幾種方法
(1).濃鹽法
利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提，得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖蕩，使乳化，再離心除去蛋白質(zhì)，此時蛋白質(zhì)凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位于上層水相中，用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉淀出來.
也可用0.15 MNaCL液反復(fù)洗滌細胞破碎液除去RNP，再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白，再按氯仿---異醇法除去蛋白.
兩種方法比較，后種方法使核酸降解可能少一些.
以稀鹽酸溶液提取DNA 時，加入適量去污劑，如SDS可有助于蛋白質(zhì)與DNA 的分離.在提取過程中為抑制組織中的DNase對DNA 的降解作用，在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉，并稱SSC溶液，提取DNA.
(2).陰離子去污劑法：
用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質(zhì)變性，可以直接從生物材料中提取DNA .由于細胞中DNA與蛋白質(zhì)之間常借靜電引力或配位鍵結(jié)合，因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵，所以常用陰離子去污劑提取DNA.
(3).苯酚抽提法：
苯酚作為蛋白變性劑，同時抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時，由于蛋白與DNA 聯(lián)結(jié)鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶.蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相.離心分層后取出水層，多次重復(fù)操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性質(zhì)，用乙醇沉淀DNA .此時DNA是十分粘稠的物質(zhì)，可用玻璃漫漫繞成一團，取出.此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態(tài) .
( 4).水抽提法：
利用核酸溶解于水的性質(zhì)，將組織細胞破碎后，用低鹽溶液除去RNA，然后將沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，離心后收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調(diào)節(jié)至2.6M.加入2倍體積95%乙醇，立即用攪拌法攪出.然后分別用66% 80%和95%乙醇以及丙銅洗滌，最后在空氣中干燥，既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質(zhì)含量較高，故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良，在提取過程中加入SDS.
