目的采用β-葡萄糖苷酶水解黃芪甲苷,并對其酶水解動(dòng)力學(xué)進(jìn)行初步研究。
方法以HPLC-ELSD法檢測水解液中黃芪甲苷及水解產(chǎn)物環(huán)黃芪醇-6-O-β-D-葡萄糖苷(CMG)的量,以黃芪甲苷的水解轉化率為指標,考察各反應因素對轉化率的影響,并對該反應進(jìn)行動(dòng)力學(xué)研究。結果最佳反應條件為反應溫度50℃,溶液pH值5.0,酶濃度460 U/mL,底物初始濃度0.1 mmol/L,反應時(shí)間48 h;在此條件下,水解轉化率達到90%以上。
在最佳反應條件下,該水解反應過(guò)程符合單底物Michaelis Menten方程,其中最大反應速率(Vm)值為0.037 mmol/(L.min),米氏常數(Km)值為5.8 mmol/L。結論采用β-葡萄糖苷酶水解黃芪甲苷制備CMG可行;商品化的β-葡萄糖苷酶并非黃芪甲苷的特異性水解酶。
苷類(lèi)水解的注意事項 ①按苷鍵原子不同,酸水解的易難順序為:N-苷>O-苷>S-苷>C-苷。
②呋喃糖苷較吡喃糖苷易水解。
③酮糖較醛糖易水解。
④吡喃糖苷中吡喃環(huán)的C-5上取代基越大越難水解,因此五碳糖最易水解,其順序為五碳糖>甲基五碳糖>六碳糖>七碳糖。如果接有-COOH,則最難水解。
⑤氨基糖較羥基糖難水解,羥基糖又較去氧糖難水解。
⑥芳香屬苷,如酚苷因苷元部分有供電子結構,水解比脂肪屬苷如萜苷、甾苷容易得多。
⑦苷元為小基團者,苷鍵橫鍵的比苷健豎鍵的易水解,因為橫鍵上原子易于質(zhì)子化。苷元為大基團者,苷鍵豎鍵的比橫鍵的易水解,因為苷的不穩定性促使水解。
⑧N- 苷易接受質(zhì)子,但當N原子處于嘧啶或酰胺位置時(shí),N-苷也難于用礦酸水解。
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