菌落計數器方法(菌落計數器的使用方法)
1.菌落計數器的使用方法
1、將電源插頭插入220V電源插座內。將探筆插入儀器上的探筆插孔內。
2、將電源開(kāi)關(guān)撥向開(kāi)，計數池內燈亮。同時(shí)顯示窗內顯示明亮的，表示允許進(jìn)行計數。
3、將待檢的培養皿底朝上放入計數池內。用探筆在培養皿底面對所有的菌落逐個(gè)點(diǎn)數。此時(shí)，菌落處被標上顏色，顯示窗內數字自動(dòng)累加。
4、用放大鏡仔細檢查，確認點(diǎn)數無(wú)遺漏，計數即已完畢。
5、顯示窗內的數字即為該培養皿內的菌落數。
6、記錄數字后取出培養皿。按復按鈕，顯示恢復，為另一培養皿的計數做好準備。
2.菌落計數有哪些的方法
原發(fā)布者：jxc2520
食品微生物學(xué)檢驗菌落總數測定一、培養基和試劑1、平板計數瓊脂（platecountagar,PCA）培養基成分胰蛋白胨5.0g酵母浸膏2.5g葡萄糖1.0g瓊脂15.0g蒸餾水1000mLpH7.0±0.2制法：將上述成分加于蒸餾水中，煮沸溶解，調節pH。分裝試管或錐形瓶，121℃高壓滅菌15min。2、磷酸鹽緩沖液成分磷酸二氫鉀（KH2PO4）34.0g蒸餾水500mLpH7.2制法：貯存液：稱(chēng)取34.0g的磷酸二氫鉀溶于500mL蒸餾水中，用大約175mL的1mol/L氫氧化鈉溶液調節pH，用蒸餾水稀釋至1000mL后貯存于冰箱。稀釋液：取貯存液1.25mL，用蒸餾水稀釋至1000mL，分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌15min。3、無(wú)菌生理鹽水成分氯化鈉8.5g蒸餾水1000mL制法：稱(chēng)取8.5g氯化鈉溶于1000mL蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min。二、操作步驟樣品的稀釋1、固體和半固體樣品：稱(chēng)取25g樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內，8000r/min~10000r/min均質(zhì)1min~2min，或放入盛有225mL稀釋液的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min~2min，制成1:10的樣品勻液。2、液體樣品：以無(wú)菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌錐形瓶（瓶?jì)阮A置適當數量
3.統計菌落數目的方法有哪些
統計菌落數目的方法有直接計數法 和間接計數法兩種。
1. 直接計數法
直接計數法是將稀釋的樣品滴在計 數板上，蓋上蓋玻片，然后在顯微鏡下計 數4?5個(gè)中格的細菌數，并求出每個(gè)小 格所含細菌的平均數，再按公式求出每 毫升樣品中所含的細菌數。計算公式 為：每毫升原液所含細菌數=每小格平 均細菌數X400X1 000X稀釋倍數。這 種方法的優(yōu)點(diǎn)是所需設備比較簡(jiǎn)單，能 迅速得到結果，而且在計數的同時(shí)還可 以觀(guān)察到所研究的微生物的形態(tài)特征； 缺點(diǎn)是不能區分死菌與活菌。
2. 間接計數法
在應用稀釋涂布平板法計數時(shí)，首 先要將待測樣品配制成均勻的系列稀釋 液，盡量使微生物細胞分散開(kāi)，再把稀釋 液接種到平板上，進(jìn)行培養觀(guān)察。但值 得注意的是，統計的菌落數往往比活菌 的實(shí)際數目低，而且統計的結果一般用 菌落數而不用活菌數來(lái)表示。計算公式 為：每克樣品中的菌落數= （C+V）X M，其中，C表示某一稀釋度下平板上生長(cháng)的平均菌落數，V表示涂布平板時(shí)所 用的稀釋液的體積（mL）,M代表稀釋 倍數。
4.微生物計數方法有哪些
微生物計數方法：
1. 血細胞計數法
將稀釋的菌液樣品滴在血細胞計數板上，在顯微鏡下計算4~5個(gè)中格的細菌數，并求出每個(gè)小格所含細菌的平均數，再以此為依據，估算總菌數。
①此法的缺點(diǎn)是不能區分死菌和活菌。
②對壓在小方格界線(xiàn)上的細菌，應當取平均值計數。
③此法可用于測定培養液中酵母菌種群數量的變化
2. 稀釋涂布平板法
每個(gè)活細菌在適宜的培養基和良好的生長(cháng)條件下可以通過(guò)生長(cháng)形成菌落.培養基表面生長(cháng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌.
①這一方法常用來(lái)統計樣品中活菌的數目
②統計的菌落數往往比活菌的實(shí)際數目低，原因是當兩個(gè)活多個(gè)細胞連在一起時(shí)，平板上觀(guān)察到的只是一個(gè)菌落.因此統計結果一般用菌落數而不是用活菌數來(lái)表示.
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽孢與孢子等的數量均可用此法測定.但不適于測定樣品中絲狀體微生物，例如放線(xiàn)菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營(yíng)養體等.
④此法若不培養成菌落，可通過(guò)將一定量的菌液均勻地涂布在玻片上的一定面積上，經(jīng)固定染色后在顯微鏡下計數，這樣又稱(chēng)涂片計數法.染色可用臺盼藍，臺盼藍能使死細胞染成藍色，可分別計數死細胞和活細胞.
3. 濾膜法
濾膜法是當樣品中菌數很低時(shí)，可將一定體積的湖水、海水或飲用水燈樣品通過(guò)膜過(guò)濾器.然后將濾膜干燥、染色，并經(jīng)處理使膜透明，再在顯微鏡下計算膜上（或一定面積上）的細菌數.
此法也可以通過(guò)培養觀(guān)察形成的菌落數來(lái)推算樣品中的菌數.例如測定飲用水中大腸桿菌的數目：將已知體積的水過(guò)濾后，將濾膜放在伊紅美藍培養基上培養.在該培養基上大腸桿菌的菌落呈現黑色，可根據培養基上黑色菌落的數目，計算出水樣中大腸桿菌的數目.
此法也是統計樣品中活菌的數目.
4. 比濁法
在一定范圍內，菌是懸液中細胞濃度與混濁度成正比，即與光密度成正比，菌越多，光密度越大.因此可借助與分光光度計，在一定波長(cháng)下，測定菌懸液的光密度，以光密度表示菌量.實(shí)驗測量時(shí)一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線(xiàn)性范圍內，否則不準確.
5. 顯微鏡直接計數法
在課本生物選修1生物技術(shù)實(shí)踐P22中“除了上述活菌計數法外，顯微鏡直接計數也是測定微生物數量的常用方法.”這里說(shuō)的顯微鏡直接計數，我認為應該是在稀釋涂布的基礎上不培養成菌落而通過(guò)染色的方法在顯微鏡下直接計數.再如濾膜法也一樣，可以有兩種情況.
另外，微生物計數法發(fā)展迅速，多種多樣的快速、簡(jiǎn)易、自動(dòng)化的儀器和裝置等方法可以用來(lái)統計微生物的數目
微生物計數：
病毒以外的微生物的計數。樣品中可測到總的（死的和活的）細胞數，稱(chēng)為總細胞數，樣品中可測到的活的細胞數稱(chēng)活細胞數。
總細胞數可用電子儀器或直接計數法測定。含有低細胞濃度的液體樣品。可以用膜過(guò)濾并在膜上對細胞染色，在顯微鏡下計數活細胞數的側定。可由：（1）在計數室內測定用活體染色劑染色的樣品，（2）稀釋平板法，（3）菌落計數，樣品中活細胞數目由接種了樣品的，發(fā)育在適合培養基上的菌落數目推定。培養基和（或）培養條件的選擇，可以極大地影響形成菌落的活細胞數。某些類(lèi)型的細胞，趨向于叢生或鏈生，這些微生物的準確的活細胞計數不能用上述方法，可依據“單位體積菌落形成單位，（cotony-formingunit/ valwne）來(lái)計數。 上述方法，一般適用于大部分細菌和泡子計數，其中一些方法，'可用于某些藻類(lèi)、真菌和原生動(dòng)物。在顯微鏡下，計數迅速運動(dòng)的原生動(dòng)物，可以用粘性懸浮培養基，如2-5I甲基纖維素。降低它們的運動(dòng)逮度。
5.統計菌落數目的方法有哪些
統計菌落數目的方法有直接計數法 和間接計數法兩種。
1. 直接計數法直接計數法是將稀釋的樣品滴在計 數板上，蓋上蓋玻片，然后在顯微鏡下計 數4?5個(gè)中格的細菌數，并求出每個(gè)小 格所含細菌的平均數，再按公式求出每 毫升樣品中所含的細菌數。計算公式 為：每毫升原液所含細菌數=每小格平 均細菌數X400X1 000X稀釋倍數。
這 種方法的優(yōu)點(diǎn)是所需設備比較簡(jiǎn)單，能 迅速得到結果，而且在計數的同時(shí)還可 以觀(guān)察到所研究的微生物的形態(tài)特征； 缺點(diǎn)是不能區分死菌與活菌。2. 間接計數法在應用稀釋涂布平板法計數時(shí)，首 先要將待測樣品配制成均勻的系列稀釋 液，盡量使微生物細胞分散開(kāi)，再把稀釋 液接種到平板上，進(jìn)行培養觀(guān)察。
但值 得注意的是，統計的菌落數往往比活菌 的實(shí)際數目低，而且統計的結果一般用 菌落數而不用活菌數來(lái)表示。計算公式 為：每克樣品中的菌落數= （C+V）X M，其中，C表示某一稀釋度下平板上生長(cháng)的平均菌落數，V表示涂布平板時(shí)所 用的稀釋液的體積（mL）,M代表稀釋 倍數。
6.微生物計數方法有哪些
測定微生物細胞數目的方法有很多，介紹幾種1.血細胞計數法將稀釋的菌液樣品滴在血細胞計數板上，在顯微鏡下計算4~5個(gè)中格的細菌數，并求出每個(gè)小格所含細菌的平均數，再以此為依據，估算總菌數。
①此法的缺點(diǎn)是不能區分死菌和活菌。②對壓在小方格界線(xiàn)上的細菌，應當取平均值計數。
③此法可用于測定培養液中酵母菌種群數量的變化2.稀釋涂布平板法原理：每個(gè)活細菌在適宜的培養基和良好的生長(cháng)條件下可以通過(guò)生長(cháng)形成菌落。培養基表面生長(cháng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。
①這一方法常用來(lái)統計樣品中活菌的數目②統計的菌落數往往比活菌的實(shí)際數目低，原因是當兩個(gè)活多個(gè)細胞連在一起時(shí)，平板上觀(guān)察到的只是一個(gè)菌落。因此統計結果一般用菌落數而不是用活菌數來(lái)表示。
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽孢與孢子等的數量均可用此法測定。但不適于測定樣品中絲狀體微生物，例如放線(xiàn)菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營(yíng)養體等。
④此法若不培養成菌落，可通過(guò)將一定量的菌液均勻地涂布在玻片上的一定面積上，經(jīng)固定染色后在顯微鏡下計數，這樣又稱(chēng)涂片計數法。染色可用臺盼藍，臺盼藍能使死細胞染成藍色，可分別計數死細胞和活細胞。
3.濾膜法 濾膜法是當樣品中菌數很低時(shí)，可將一定體積的湖水、海水或飲用水燈樣品通過(guò)膜過(guò)濾器。然后將濾膜干燥、染色，并經(jīng)處理使膜透明，再在顯微鏡下計算膜上（或一定面積上）的細菌數。
此法也可以通過(guò)培養觀(guān)察形成的菌落數來(lái)推算樣品中的菌數。例如測定飲用水中大腸桿菌的數目：將已知體積的水過(guò)濾后，將濾膜放在伊紅美藍培養基上培養。
在該培養基上大腸桿菌的菌落呈現黑色，可根據培養基上黑色菌落的數目，計算出水樣中大腸桿菌的數目。此法也是統計樣品中活菌的數目。
4.比濁法原理是在一定范圍內，菌是懸液中細胞濃度與混濁度成正比，即與光密度成正比，菌越多，光密度越大。因此可借助與分光光度計，在一定波長(cháng)下，測定菌懸液的光密度，以光密度表示菌量。
實(shí)驗測量時(shí)一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線(xiàn)性范圍內，否則不準確。 5.顯微鏡直接計數法在課本生物選修1生物技術(shù)實(shí)踐P22中“除了上述活菌計數法外，顯微鏡直接計數也是測定微生物數量的常用方法。”
這里說(shuō)的顯微鏡直接計數，我認為應該是在稀釋涂布的基礎上不培養成菌落而通過(guò)染色的方法在顯微鏡下直接計數。再如濾膜法也一樣，可以有兩種情況。
另外，微生物計數法發(fā)展迅速，多種多樣的快速、簡(jiǎn)易、自動(dòng)化的儀器和裝置等方法可以用來(lái)統計微生物的數目。
7.微生物計數方法有哪些
微生物的顯微直接計數法
一、實(shí)驗目的
了解血球計數板的構造、計數原理和計數方法，掌握顯微鏡下直接計數的技能。
二、實(shí)驗原理
測定微生物細胞數量的方法很多，通常采用的有顯微直接計數法和平板計數法。
顯微計數法適用于各種含單細胞菌體的純培養懸浮液，如有雜菌或雜質(zhì)，常不易分辨。菌體較大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球計數板，一般細菌則采用彼得羅夫·霍澤（Petrof Hausser）細菌計數板。兩種計數板的原理和部件相同，只是細菌計數板較薄，可以使用油鏡觀(guān)察。而血球計數板較厚，不能使用油鏡，計數板下部的細菌不易看清。
血球計數板是一塊特制的厚型載玻片，載玻片上有4條槽而構成3個(gè)平臺。中間的平臺較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個(gè)半邊上面各有一個(gè)計數區（圖21-1），計數區的刻度有兩種：一種是計數區分為16個(gè)大方格（大方格用三線(xiàn)隔開(kāi)），而每個(gè)大方格又分成25個(gè)小方格；另一種是一個(gè)計數區分成25個(gè)大方格（大方格之間用雙線(xiàn)分開(kāi)），而每個(gè)大方格又分成16個(gè)小方格。但是不管計數區是哪一種構造，它們都有一個(gè)共同特點(diǎn)，即計數區都由400個(gè)小方格組成。
計數區邊長(cháng)為1mm，則計數區的面積為l mm2，每個(gè)小方格的面積為1/400mm2。蓋上蓋玻片后，計數區的高度為0.1mm，所以每個(gè)計數區的體積為0.1mm3，每個(gè)小方格的體積為1/4000mm3。
使用血球計數板計數時(shí)，先要測定每個(gè)小方格中微生物的數量，再換算成每毫升菌液（或每克樣品）中微生物細胞的數量。
已知：1mm3體積=10 mm*10 mm*10 mm= 1000mm3
所以：1mm3體積應含有小方格數為1000mm3/1/4000mm3=4*106個(gè)小方格，即系數K=4*106 。
因此：每ml菌懸液中含有細胞數= 每個(gè)小格中細胞平均數（N）*系數（K）*菌液稀釋倍數（d）
三、實(shí)驗器材
1.活材料：釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）斜面或培養液。
2.器材：顯微鏡、血球計數板、蓋玻片（22mm*22mm）、吸水紙、計數器、滴管、擦鏡紙。
四、實(shí)驗方法
1.視待測菌懸液濃度，加無(wú)菌水適當稀釋?zhuān)ㄐ泵嬉话阆♂尩?0-2），以每小格的菌數可數為度。
2.取潔凈的血球計數板一塊，在計數區上蓋上一塊蓋玻片。
3.將酵母菌懸液搖勻，用滴管吸取少許，從計數板中間平臺兩側的溝槽內沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴（不宜過(guò)多），讓菌懸液利用液體的表面張力充滿(mǎn)計數區，勿使氣泡產(chǎn)生，并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計數區上，不要使計數區兩邊平臺沾上菌懸液，以免加蓋蓋玻片后，造成計數區深度的升高。然后加蓋蓋玻片（勿使產(chǎn)生氣泡）。4.靜置片刻，將血球計數板置載物臺上夾穩，先在低倍鏡下找到計數區后，再轉換高倍鏡觀(guān)察并計數。由于生活細胞的折光率和水的折光率相近，觀(guān)察時(shí)應減弱光照的強度。
5.計數時(shí)若計數區是由16個(gè)大方格組成，按對角線(xiàn)方位，數左上、左下、右上、右下的4個(gè)大方格（即100小格）的菌數。如果是25個(gè)大方格組成的計數區，除數上述四個(gè)大方格外，還需數中央l個(gè)大方格的菌數（即80個(gè)小格）。如菌體位于大方格的雙線(xiàn)上，計數時(shí)則數上線(xiàn)不數下線(xiàn)，數左線(xiàn)不數右線(xiàn)，以減少誤差。
6.對于出芽的酵母菌，芽體達到母細胞大小一半時(shí)，即可作為兩個(gè)菌體計算。每個(gè)樣品重復計數2—3次（每次數值不應相差過(guò)大，否則應重新操作），求出每一個(gè)小格中細胞平均數（N），按公式計算出每ml(g)菌懸液所含酵母菌細胞數量。
7.測數完畢，取下蓋玻片，用水將血球計數板沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風(fēng)機吹干，放入盒內保存。
五、實(shí)驗作業(yè)：
將實(shí)驗結果填入下表中：
計數次數 每個(gè)大方格菌數 稀 釋
倍 數 試管斜面中的總菌數 平均值
1 2 3 4 5
第一次
第二次
8.菌落計數器的介紹
現在隨著(zhù)科技的進(jìn)步，菌落計數技術(shù)日趨完善。主要體現在配置越來(lái)越高，功能越來(lái)越全。計數的速度越來(lái)越快，準確性也越來(lái)越高。所以，價(jià)格也就節節攀升。一般對于精確度要求不高的用戶(hù)，可以考慮手動(dòng)的或者半自動(dòng)的菌落計數器。手動(dòng)的價(jià)格比較便宜，市場(chǎng)價(jià)大約都在800-1200元，稍微好點(diǎn)的，是半自動(dòng)的帶有語(yǔ)音讀報功能的，放大倍數在3級以上的，市場(chǎng)價(jià)要2500元左右，這種已經(jīng)能夠滿(mǎn)足大多數用戶(hù)的計數要求。較高配置的全自動(dòng)計數器，多用在微生物實(shí)驗室里，像素主要有300萬(wàn)，900萬(wàn)和1000萬(wàn)三個(gè)規格。軟件方面添加了很多分析功能，價(jià)格也在3-8萬(wàn)。進(jìn)口的菌落計數器主要來(lái)自三個(gè)國家，德國、英國和法國的。就相同功能的半自動(dòng)儀器，國產(chǎn)的和進(jìn)口的價(jià)格相差大概在2-3倍。全自動(dòng)的價(jià)格也相差一倍之多。需求者應該充分考慮自己的需求側重點(diǎn)和預算進(jìn)行選購。
