還可以用哪些方法提取蛋白質(zhì)(請(qǐng)教蛋白質(zhì)提取方法)

1.請(qǐng)教蛋白質(zhì)提取方法

（一）水溶液提取法

稀鹽和緩沖系統(tǒng)的水溶液對(duì)蛋白質(zhì)穩(wěn)定性好、溶解度大、是提取蛋白質(zhì)最常用的溶劑，通常用量是原材料體積的1-5倍，提取時(shí)需要均勻的攪拌，以利于蛋白質(zhì)的溶解。提取的溫度要視有效成份性質(zhì)而定。一方面，多數(shù)蛋白質(zhì)的溶解度隨著溫度的升高而增大，因此，溫度高利于溶解，縮短提取時(shí)間。但另一方面，溫度升高會(huì)使蛋白質(zhì)變性失活，因此，基于這一點(diǎn)考慮提取蛋白質(zhì)和酶時(shí)一般采用低溫（5度以下）操作。為了避免蛋白質(zhì)提以過(guò)程中的降解，可加入蛋白水解酶抑制劑（如二異丙基氟磷酸，碘乙酸等）。

（二）有機(jī)溶劑提取法

一些和脂質(zhì)結(jié)合比較牢固或分子中非極性側(cè)鏈較多的蛋白質(zhì)和酶，不溶于水、稀鹽溶液、稀酸或稀堿中，可用乙醇、丙酮和丁醇等有機(jī)溶劑，它們具的一定的親水性，還有較強(qiáng)的親脂性、是理想的提脂蛋白的提取液。但必須在低溫下操作。丁醇提取法對(duì)提取一些與脂質(zhì)結(jié)合緊密的蛋白質(zhì)和酶特別優(yōu)越，一是因?yàn)槎〈加H脂性強(qiáng)，特別是溶解磷脂的能力強(qiáng)；二是丁醇兼具親水性，在溶解度范圍內(nèi)（度為10%,40度為6.6%）不會(huì)引起酶的變性失活。另外，丁醇提取法的pH及溫度選擇范圍較廣，也適用于動(dòng)植物及微生物材料。

2.蛋白質(zhì)分離純化的四種方法

1、鹽析法：

鹽析法的根據(jù)是蛋白質(zhì)在稀鹽溶液中，溶解度會(huì)隨鹽濃度的增高而上升，但當(dāng)鹽濃度增高到一定數(shù)值時(shí)，使水活度降低，進(jìn)而導(dǎo)致蛋白質(zhì)分子表面電荷逐漸被中和，水化膜逐漸被破壞，最終引起蛋白質(zhì)分子間互相凝聚并從溶液中析出。

2、有機(jī)溶劑沉淀法：

有機(jī)溶劑能降低蛋白質(zhì)溶解度的原因有二：其一、與鹽溶液一樣具有脫水作用；其二、有機(jī)溶劑的介電常數(shù)比水小，導(dǎo)致溶劑的極性減小。

3、蛋白質(zhì)沉淀劑：

蛋白質(zhì)沉淀劑僅對(duì)一類或一種蛋白質(zhì)沉淀起作用，常見的有堿性蛋白質(zhì)、凝集素和重金屬等。

4、聚乙二醇沉淀作用：

聚乙二醇和右旋糖酐硫酸鈉等水溶性非離子型聚合物可使蛋白質(zhì)發(fā)生沉淀作用。

擴(kuò)展資料：

蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，是有機(jī)大分子，是構(gòu)成細(xì)胞的基本有機(jī)物，是生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者。沒有蛋白質(zhì)就沒有生命。氨基酸是蛋白質(zhì)的基本組成單位。它是與生命及與各種形式的生命活動(dòng)緊密聯(lián)系在一起的物質(zhì)。

機(jī)體中的每一個(gè)細(xì)胞和所有重要組成部分都有蛋白質(zhì)參與。蛋白質(zhì)占人體重量的16%~20% ，即一個(gè)60kg重的成年人其體內(nèi)約有蛋白質(zhì)9.6~12kg。

人體內(nèi)蛋白質(zhì)的種類很多，性質(zhì)、功能各異，但都是由20多種氨基酸（Amino acid）按不同比例組合而成的，并在體內(nèi)不斷進(jìn)行代謝與更新。

參考資料來(lái)源：百度百科-蛋白質(zhì)分離純化

3.植物蛋白質(zhì)的提取方法

植物蛋白質(zhì)的提取方法基本上有這幾種：鹽析法、有機(jī)溶劑法和等電點(diǎn)法。zhidao

1、鹽析法

原理：鹽析法是指在藥物溶液中加入大量的無(wú)機(jī)鹽，使某些高分子物質(zhì)的溶解度降低沉淀析出，而與其他成分分離的方法。鹽析法主要用于蛋白質(zhì)的分離純化。常作鹽析的無(wú)機(jī)鹽有硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。

2、有機(jī)溶劑法

原理：機(jī)溶劑引起蛋白質(zhì)沉淀的主要原因是加入有機(jī)溶劑使水溶液的介電常數(shù)降低，因而增加了兩個(gè)相反電荷基團(tuán)之間的吸引力，促進(jìn)了蛋白質(zhì)分子的聚集和沉淀。有機(jī)溶劑引起蛋白質(zhì)沉淀的另一種解釋認(rèn)專為與鹽析相似，有機(jī)溶劑與蛋白質(zhì)爭(zhēng)奪水化水，致使蛋白質(zhì)脫除水化膜，而易于聚集形成沉淀 。

3、等電點(diǎn)法

原理：在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)分子以兩性離子形式存在，其分子凈電荷為零（即正負(fù)電荷相等），此時(shí)蛋白質(zhì)分子顆粒在溶液中因沒有相同電荷的相互排斥，分子相互之間的作用力減弱，其顆粒極易碰撞、凝聚而產(chǎn)生沉淀，所以蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)，其溶解度最小，最易形成沉淀物。

等電點(diǎn)時(shí)的許多物理性質(zhì)屬如黏度、膨脹性、滲透壓等都變小，從而有利于懸浮液的過(guò)濾。

4.蛋白質(zhì)有哪些提取方法

大部分蛋白質(zhì)都可溶于水、稀鹽、稀酸或堿溶液，少數(shù)與脂類結(jié)合的蛋白質(zhì)則溶于乙醇、丙酮、丁醇等有機(jī)溶劑中，因些，可采用不同溶劑提取分離和純化蛋白質(zhì)及酶。

（一）水溶液提取法 稀鹽和緩沖系統(tǒng)的水溶液對(duì)蛋白質(zhì)穩(wěn)定性好、溶解度大、是提取蛋白質(zhì)最常用的溶劑，通常用量是原材料體積的1-5倍，提取時(shí)需要均勻的攪拌，以利于蛋白質(zhì)的溶解。 提取的溫度要視有效成份性質(zhì)而定。

一方面，多數(shù)蛋白質(zhì)的溶解度隨著溫度的升高而增大，因此，溫度高利于溶解，縮短提取時(shí)間。但另一方面，溫度升高會(huì)使蛋白質(zhì)變性失活，因此，基于這一點(diǎn)考慮提取蛋白質(zhì)和酶時(shí)一般采用低溫（5度以下）操作。

為了避免蛋白質(zhì)提以過(guò)程中的降解，可加入蛋白水解酶抑制劑（如二異丙基氟磷酸，碘乙酸等）。 （二）有機(jī)溶劑提取法 一些和脂質(zhì)結(jié)合比較牢固或分子中非極性側(cè)鏈較多的蛋白質(zhì)和酶，不溶于水、稀鹽溶液、稀酸或稀堿中，可用乙醇、丙酮和丁醇等有機(jī)溶劑，它們具的一定的親水性，還有較強(qiáng)的親脂性、是理想的提脂蛋白的提取液。

但必須在低溫下操作。 丁醇提取法對(duì)提取一些與脂質(zhì)結(jié)合緊密的蛋白質(zhì)和酶特別優(yōu)越，一是因?yàn)槎〈加H脂性強(qiáng)，特別是溶解磷脂的能力強(qiáng)；二是丁醇兼具親水性，在溶解度范圍內(nèi)（度為10%,40度為6。

6%）不會(huì)引起酶的變性失活。另外，丁醇提取法的pH及溫度選擇范圍較廣，也適用于動(dòng)植物及微生物材料。

5.目前常用的植物蛋白提取方法有哪些

您好。

一、植物組織蛋白質(zhì)提取方法 1、根據(jù)樣品重量（1g樣品加入3.5ml提取液，可根據(jù)材料不同適當(dāng)加入），準(zhǔn)備提取液放在冰上。 2、把樣品放在研缽中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上靜置（3-4小時(shí)）。

3、用離心機(jī)離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清液，樣品制備完成。 蛋白質(zhì)提取液：300ml 1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml 2、甘油（Glycerol）75ml 3、聚乙烯吡咯烷酮（）6g 這種方法針對(duì)SDS-PAGE，垂直板電泳！ 二、植物組織蛋白質(zhì)提取方法 氯醋酸—丙酮沉淀法 1、在液氮中研磨葉片 2、加入樣品體積3倍的提取液在-20℃的條件下過(guò)夜，然后離心（4℃8000rpm以上1小時(shí)）棄上清。

3、加入等體積的冰浴丙酮（含0.07%的β-巰基乙醇），搖勻后離心（4℃8000rpm以上1小時(shí)），然后真空干燥沉淀，備用。 4、上樣前加入裂解液，室溫放置30分鐘，使蛋白充分溶于裂解液中，然后離心（15℃8000rpm以上1小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間以沒有沉淀為標(biāo)準(zhǔn)），可臨時(shí)保存在4℃待用。

5、用Brandford法定量蛋白，然后可分裝放入-80℃?zhèn)溆谩?藥品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巰基乙醇的丙酮。

裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml滅菌的去離子水中（終體積為5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。 這種方法針對(duì)雙向電泳，雜質(zhì)少，離子濃度小的特點(diǎn)！當(dāng)然單向電泳也同樣適用，只是電泳的條帶會(huì)減少！ 三、組織：腸黏膜 目的：WESTERN BLOT檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá) 應(yīng)用TRIPURE提取蛋白質(zhì)步驟： 含蛋白質(zhì)上清液中加入異丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量） 倒轉(zhuǎn)混勻，置室溫10min 離心：12000 g,10min,4度，棄上清 加入0.3M鹽酸胍/95%乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量） 振蕩，置室溫20min 離心： 7500g,5 min,4度，棄上清 重復(fù)0.3M鹽酸胍/95%乙醇步2次 沉淀中加入100%乙醇 2ml 充分振蕩混勻，置室溫20 min 離心： 7500g,5min,4度，棄上清吹干沉淀 1%SDS溶解沉淀 離心：10000g,10min,4度 取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT） 存在的問(wèn)題：加入1%SDS后沉淀不溶解，還是很大的一塊，4度離心后又多了白色沉定，SDS結(jié)晶？測(cè)濃度，含量才1mg/ml左右。

解決：提蛋白試劑盒，另外組織大小適中，要碎，立即加2X BUFFER，然后煮5-10分鐘，效果很好的。 四、植物材料：水稻苗，葉鞘，根 1、200毫克樣品置于冰上磨碎 2、加lysis buffer，離心，10000rpm,4度，5min取上清 3、重復(fù)離心5min lysis buffer:urea np-40 ampholine 2-me pvp-40 五、蛋白質(zhì)樣品制備 秧苗蛋白質(zhì)樣品的提取按Davermal等（1986）的方法進(jìn)行。

100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40（聚乙烯吡咯烷酮）及少量石英砂，用液氮研磨成粉，加入1.5 ml 10% 三氯乙酸（丙酮配制，含10mM即0.07%β-巰基乙醇），混勻，-20℃沉淀1小時(shí)，4℃，15000 r/min離心15 min，棄上清，沉淀復(fù)溶于1.5ml冷丙酮（含10 mMβ-巰基乙醇），再于-20℃沉淀1小時(shí)，同上離心棄上清，（有必要再用80%丙酮（含10 mMβ-巰基乙醇所得沉淀低溫冷凍真空抽干。 按每mg干粉加入20μl（可調(diào)） UKS液[9.5 M尿素，5mM碳酸鉀，1.25%SDS,0.5%DTT（二硫蘇糖醇），2% Ampholine (Amersham Pharmacia Biotech Inc,pH3.5-10),6% Triton X-100],37℃溫育30min，期間攪動(dòng)幾次，28度 （溫度低，高濃度的尿素會(huì)讓溶液結(jié)冰）16000 r/min離心15 min，離心力越大時(shí)間長(zhǎng)一點(diǎn)越好！上清即可上樣電泳。

或者-70度保存 六、植物根中蛋白質(zhì)的抽取 （1） sample， 液氮研磨 （2） 裝1.5 ml centrifuge 用tube (3) 加 1M KH2PO4 K2HPO4 700 ul (4) 12000 rpm, 4度， 10-15minite (5) 取上層液，蛋白質(zhì)就在里面。

6.請(qǐng)教蛋白質(zhì)提取方法

提取某一特定蛋白質(zhì)的一般程序可以分為前處理、粗分級(jí)、細(xì)分級(jí)三步。

前處理 提取某種蛋白質(zhì)，首先要把蛋白質(zhì)從原來(lái)的組織或細(xì)胞中以溶解的狀態(tài)釋放出來(lái)并保持原來(lái)的天然狀態(tài)，不丟失生物活性。為此，動(dòng)物材料應(yīng)先剔除結(jié)締組織和脂肪組織，種子材料應(yīng)先去殼甚至去種皮以免受單寧等物質(zhì)的污染，油料種子最好先用低沸點(diǎn)的有機(jī)溶劑如乙醚等脫脂。

然后根據(jù)不同的情況，選擇適當(dāng)?shù)姆椒?，將組織和細(xì)胞破碎。動(dòng)物組織和細(xì)胞可用電動(dòng)搗碎機(jī)或勻漿機(jī)破碎或用超聲波處理破碎。

植物組織和細(xì)胞由于具有纖維素、半纖維素和果膠等物質(zhì)組成的細(xì)胞壁，一般需要用石英砂或玻璃粉和適當(dāng)?shù)奶崛∫阂黄鹧心サ姆椒ɑ蛴美w維素酶處理也能達(dá)到目的。細(xì)菌細(xì)胞的破碎比較麻煩，因?yàn)檎麄€(gè)細(xì)菌細(xì)胞壁的骨架實(shí)際上是一個(gè)借共價(jià)鍵連接而成的肽聚糖囊狀大分子，非常堅(jiān)韌。

破碎細(xì)菌細(xì)胞壁的常用方法有超聲波破碎，與砂研磨、高壓擠壓或溶菌酶處理等。組織和細(xì)胞破碎后，選擇適當(dāng)?shù)木彌_液把所要的蛋白提取出來(lái)。

細(xì)胞碎片等不溶物用離心或過(guò)濾的方法除去。 如果所要的蛋白主要集中在某一細(xì)胞組分，如細(xì)胞核、染色體、核糖體或可溶性細(xì)胞質(zhì)等，則可利用差速離心的方法將它們分開，收集該細(xì)胞組分作為下步提取的材料。

如果碰上所要蛋白是與細(xì)胞膜或膜質(zhì)細(xì)胞器結(jié)合的，則必須利用超聲波或去污劑使膜結(jié)構(gòu)解聚，然后用適當(dāng)介質(zhì)提取。 粗分離 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)提取液（有時(shí)還雜有核酸、多糖之類）獲得后，選用一套適當(dāng)?shù)姆椒?，將所要的蛋白與其他雜蛋白分離開來(lái)。

一般這一步的分離用鹽析、等電點(diǎn)沉淀和有機(jī)溶劑分級(jí)分離等方法。這些方法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、處理量大，既能除去大量雜質(zhì)，又能濃縮蛋白溶液。

有些蛋白提取液體積較大，又不適于用沉淀或鹽析法濃縮，則可采用超過(guò)濾、凝膠過(guò)濾、冷凍真空干燥或其他方法進(jìn)行濃縮。 細(xì)分離 樣品經(jīng)粗分級(jí)分離以后，一般體積較小，雜蛋白大部分已被除去。

進(jìn)一步提取，一般使用層析法包括凝膠過(guò)濾、離子交換層析、吸附層析以及親和層析等。必要時(shí)還可選擇電泳法，包括區(qū)帶電泳、等電點(diǎn)聚焦等作為最后的提取步驟。

用于細(xì)分級(jí)分離的方法一般規(guī)模較小，但分辨率很高。 結(jié)晶是蛋白質(zhì)提取的最后步驟。

盡管結(jié)晶過(guò)程并不能保證蛋白一定是均一的，但是只有某種蛋白在溶液中數(shù)量上占有優(yōu)勢(shì)時(shí)才能形成結(jié)晶。結(jié)晶過(guò)程本身也伴隨著一定程度的提取，而重結(jié)晶又可除去少量夾雜的蛋白。

由于結(jié)晶過(guò)程中從未發(fā)現(xiàn)過(guò)變性蛋白，因此蛋白的結(jié)晶不僅是純度的一個(gè)標(biāo)志，也是斷定制品處于天然狀態(tài)的有力指標(biāo)。 離子層析法 當(dāng)被分離的蛋白質(zhì)溶液流經(jīng)離子交換層析柱時(shí)，帶有與離子交換劑相反電荷的蛋白質(zhì)被吸附在離子交換劑上，隨后用改變pH等辦法將吸附的蛋白質(zhì)洗脫下來(lái)。

有機(jī)溶劑提取 蛋白質(zhì)提取有機(jī)溶劑提取的原理是：與水互溶的有機(jī)溶劑（如甲醇、乙醇）能使一些蛋白質(zhì)在水中的溶解度顯著降低；而且在一定溫度、pH值和離子強(qiáng)度下，引起蛋白質(zhì)沉淀的有機(jī)溶劑的濃度不同，因此，控制有機(jī)溶劑的濃度可以提取蛋白質(zhì)。例如，在冰浴中磁力攪拌下，在4℃預(yù)冷的培養(yǎng)液中緩慢加入乙醇（-25℃），可以使冰核蛋白析出，從而提取冰核蛋白。

由于在室溫下，有機(jī)溶劑不僅能引起蛋白質(zhì)的沉淀，而且伴隨著變性。因此，通常要將有機(jī)溶劑冷卻，然后在不斷攪拌下加入有機(jī)溶劑防止局部濃度過(guò)高，蛋白質(zhì)變性問(wèn)題就可以很大程度上得到解決。

對(duì)于一些和脂質(zhì)結(jié)合比較牢固或分子中極性側(cè)鏈較多、不溶于水的蛋白質(zhì)，可以用乙醇、丙酮和丁醇等有機(jī)溶劑提取，它們有一定的親水性和較強(qiáng)的親脂性，是理想的提取液。冷乙醇分離法提取免疫球蛋白最早由Cohn于1949年提出，用于制備丙種球蛋白。

冷乙醇法也是WHO規(guī)程和中國(guó)生物制品規(guī)程推薦的方法，不僅分辨率高、提純效果好、可同時(shí)分離多種成分，而且有抑菌、清除和滅病毒的作用。

7.蛋白質(zhì)分離純化的5種方法主要有什么

蛋白質(zhì)分離純化常用方法有：

1、沉淀，

2、電泳：蛋白質(zhì)在高于或低于其等電點(diǎn)的溶液中是帶電的，在電場(chǎng)中能向電場(chǎng)的正極或負(fù)極移動(dòng)。根據(jù)支撐物不同，有薄膜電泳、凝膠電泳等。

3、透析：利用透析袋把大分子蛋白質(zhì)與小分子化合物分開的方法。

4、層析：

a.離子交換層析，利用蛋白質(zhì)的兩性游離性質(zhì)，在某一特定PH時(shí)，各蛋白質(zhì)的電荷量及性質(zhì)不同，故可以通過(guò)離子交換層析得以分離。如陰離子交換層析，含負(fù)電量小的蛋白質(zhì)首先被洗脫下來(lái)。

b.分子篩，又稱凝膠過(guò)濾。小分子蛋白質(zhì)進(jìn)入孔內(nèi)，滯留時(shí)間長(zhǎng)，大分子蛋白質(zhì)不能時(shí)入孔內(nèi)而徑直流出。

5、超速離心：既可以用來(lái)分離純化蛋白質(zhì)也可以用作測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量。不同蛋白質(zhì)其密度與形態(tài)各不相同而分開。