還原糖的測定方法 食物中還原糖的測定方法:高錳酸鉀滴定法和直接滴定法。
一、高錳酸鉀滴定法1.原理 樣品經(jīng)除去蛋白質(zhì)后,其中還原糖在堿性環(huán)境下將銅鹽還原為氧化亞銅,加硫酸鐵后,氧化亞銅被氧化為銅鹽,以高錳酸鉀溶液滴定氧化作用后生成的亞鐵鹽,根據(jù)高錳酸鉀消耗量計(jì)算氧化亞同含量,再查表得還原糖量。2.適用范圍 GB5009.7-85,本法適用于所有食品中還原糖的測定以及通過酸水解或酶水解轉(zhuǎn)化成還原糖的非還原性糖類物質(zhì)的測定。
3.儀器 (1) 滴定管 (2) 25ml古氏坩堝或G4垂融坩堝 (3) 真空泵 (4) 水浴鍋4.試劑 除特殊說明外,實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水,試劑為分析純。4.1 6 mol/L鹽酸:量取50ml鹽酸加水稀釋至100 ml。
4.2 甲基紅指示劑:稱取10mg甲基紅,用100ml乙醇溶解。4.3 5 mol/L氫氧化鈉溶液:稱取20g氫氧化鈉加水溶解并稀釋至100ml。
4.4 堿性酒石酸銅甲液:稱取34.639g硫酸銅(CuSO4·5H2O),加適量水溶解,加0.5ml硫酸,再加水稀釋至500ml,用精制石棉過濾。4.5堿性酒石酸銅乙液:稱取173g酒石酸鉀鈉與50g氫氧化鈉,加適量水溶解,并稀釋至500ml,用精制石棉過濾,貯存于橡膠塞玻璃瓶中。
4.6精制石棉:取石棉先用3mol/L鹽酸浸泡2~3天,用水洗凈,再加2.5mol/L氫氧化鈉溶液浸泡2~3天,傾去溶液,再用熱堿性酒石酸銅已液浸泡數(shù)小時(shí),用水洗凈。再以3mol/L鹽酸浸泡數(shù)小時(shí),以水洗至不呈酸性。
然后加水振搖,使成微細(xì)的漿狀軟縣委,用水浸泡并貯存于玻璃瓶中,即可用做填充古氏坩堝用。4.7 0.1000mol/L高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液。
4.8 1mol/L氫氧化鈉溶液:稱取4g 氫氧化鈉,加水溶解并稀釋至100ml。4.9 硫酸鐵溶液:稱取50g硫酸鐵,加入200ml水溶解后,慢慢加入100ml硫酸,冷卻后加水稀釋至1L。
4.10 3mol/L鹽酸:量取30ml鹽酸,加水稀釋至120ml。5. 操作方法5.1 樣品處理:5.1.1 乳類、乳制品及含蛋白質(zhì)的食品:稱取約0.5~2 g固體樣品(吸取2~10 ml液體樣品),置于250 ml容量瓶中,加50ml水,搖勻。
加入10 ml堿性酒石酸銅甲液及4ml1mol/L氫氧化鈉溶液,加水至刻度,混勻。靜置30min,用干燥濾紙過濾,棄去初濾液,濾液備用。
(注:此步驟目的是沉淀蛋白)5.1.2 酒精性飲料:吸取100 ml樣品,置于蒸發(fā)皿中,用1mol/L氫氧化鈉溶液中和至中性,在水浴上蒸發(fā)至原體積1/4后(注:如果蒸發(fā)時(shí)間過長,應(yīng)注意保持溶液pH為中性),移入250ml容量瓶中。加50 ml水,混勻。
以下按5.1.1自"加10ml堿性酒石酸銅甲液"起依法操作。5.1.3 含多量淀粉的食品:稱取2~10 g樣品,置于250 ml容量瓶中,加200 ml水,在45℃水浴中加熱1h,并時(shí)時(shí)振搖。
(注意:此步驟是使還原糖溶于水中,切忌溫度過高,因?yàn)榈矸墼诟邷貤l件下可糊化、水解,影響檢測結(jié)果。)冷卻后加水至刻度,混勻,靜置。
吸取200ml上清液于另一250 ml容量瓶中,以下按5.1.1自"加10ml堿性酒石酸銅甲液"起依法操作。5.1.4 含有脂肪的食品:稱取2~10g樣品,先用乙醚或石油醚淋洗3次,去除醚層。
加入50ml水混勻,以下按5.1.1自"加10ml堿性酒石酸銅甲液"起依法操作。5.1.5 汽水等含有二氧化碳的飲料:吸取100 ml樣品置于蒸發(fā)皿中,在水浴上除去二氧化碳后,移入250ml容量瓶中,并用水洗滌蒸發(fā)皿,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混勻后,備用。
5.2 樣品測定:吸取50ml處理后的樣品溶液,于400ml燒杯中,加入25ml堿性酒石酸銅甲液及25ml乙液,于燒杯上蓋一表面皿,加熱,控制在4min內(nèi)沸騰,再準(zhǔn)確煮沸2min,乘熱用鋪好石棉的古氏坩堝或G4垂融坩堝抽濾,并用60℃熱水洗滌燒杯及沉淀,至洗液不成堿性為止。(注:還原糖與堿性酒石酸銅試劑的反應(yīng)一定要在沸騰狀態(tài)下進(jìn)行,沸騰時(shí)間需嚴(yán)格控制。
煮沸的溶液應(yīng)保持藍(lán)色,如果藍(lán)色消失,說明還原糖含量過高,應(yīng)將樣品溶液稀釋后重做。)將古氏坩堝或垂融坩堝放回原400ml燒杯中,加25ml硫酸鐵溶液及25ml水,用玻棒攪拌使氧化亞銅完全溶解,以0.1mol/L高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)液滴定至微紅色為終點(diǎn)。
同時(shí)吸取50ml水,加與測樣品時(shí)相同量的堿性酒石酸銅甲、乙液,硫酸鐵溶液及水,按同一方法做試劑空白實(shí)驗(yàn)。6. 計(jì)算:X1=(V-V0)*N*71.54 (1) 式中: X1--樣品中還原糖質(zhì)量相當(dāng)于氧化亞銅的質(zhì)量,mg;V--測定用樣品液消耗高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)液的體積,ml;V0--試劑空白消耗高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)液的體積,ml;N--高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度;71.54--1ml 1mol/L高錳酸鉀溶液相當(dāng)于氧化亞銅的質(zhì)量,mg。
根據(jù)(1)式中計(jì)算所得氧化亞銅質(zhì)量,查附表"氧化亞銅質(zhì)量相當(dāng)于葡萄糖、果糖、乳糖、轉(zhuǎn)化糖的質(zhì)量表",再計(jì)算樣品中還原糖含量。X2=(m1*V2)∕(m2*V1)*(100∕1000) (2) 式中: X2--樣品中還原糖的含量,g/100g(g/100ml);m1--查表得還原糖質(zhì)量,mg;m2--樣品質(zhì)量(或體積), g(ml);V1--測定用樣品處理液的體積,ml;V2--樣品處理后的總體積,ml。
7.舉例:稱取某食物樣品3.00g,經(jīng)過處理后用水定容至250ml。取50ml進(jìn)行測定,消耗0.1003mol/L高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)液5.20ml,同時(shí)測試劑空白為0.36ml,則 樣品中還原糖質(zhì)量相當(dāng)于氧化亞銅的質(zhì)量為:X1(mg) =(5.20-0.36)*0.1003*71.54 = 。
糖的測定方法 一般有四種方法: 1、直接滴定法。
原理為 糖還原天藍(lán)色的氫氧化銅為紅色的氧化亞銅。缺點(diǎn):水樣中的還原性物質(zhì)能對糖的測定造成影響。
2、高錳酸鉀滴定法。所用原理同直接滴定法。
缺點(diǎn):水樣中的還原性物質(zhì)能對糖的測定造成影響,過程較為復(fù)雜,誤差大。3、硫酸苯酚法。
糖在濃硫酸作用下,脫水形成的糠醛和羥甲基糠醛能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物,在10-100mg范圍內(nèi)其顏色深淺與糖的含量成正比,且在485nm波長下有最大吸收峰,故可用比色法在此波長下測定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測定,方法簡單,靈敏度高,實(shí)驗(yàn)時(shí)基本不受蛋白質(zhì)存在的影響,并且產(chǎn)生的顏色穩(wěn)定160min以上。
缺點(diǎn):如果水樣呈橙紅色(大部分水樣為黃色),會(huì)對比色法造成較大的干擾。4、蒽酮法糖在濃硫酸作用下,可經(jīng)脫水反應(yīng)生成糠醛和羥甲基糠醛,生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應(yīng)生成藍(lán)綠色糠醛衍生物,在一定范圍內(nèi),顏色的深淺與糖的含量成正比,故可用于糖的測定。
缺點(diǎn):,不同的糖類與蒽酮試劑的顯色深度不同,果糖顯色最深,葡萄糖次之,半乳糖、甘露糖較淺,五碳糖顯色更淺。綜合比較;采用蒽酮法能將最為準(zhǔn)確地測定尾水中糖的含量。
(一) 直接滴定法Ⅰ、原理 v 一定量的堿性酒石酸銅甲、乙液等量混合,立即生成天藍(lán)色的氫氧化銅沉淀,這種沉淀很快與酒石酸鈉反應(yīng),生成深藍(lán)色的可溶性酒石酸鉀鈉銅絡(luò)合物。在加熱條件下,以次甲基藍(lán)作為指示劑,用標(biāo)液滴定,樣液中的還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應(yīng),生成紅色的氧化亞銅沉淀,待二價(jià)銅全部被還原后,稍過量的還原糖把次甲基藍(lán)還原,溶液由藍(lán)色變?yōu)闊o色,即為滴定終點(diǎn)。
根據(jù)樣液消耗量可計(jì)算出還原糖含量。樣品經(jīng)除去蛋白質(zhì)后,在加熱條件下,以次甲基藍(lán)做指示劑,滴定標(biāo)定過的堿性酒石酸銅溶液(用還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定堿性酒石酸銅溶液),根據(jù)樣品溶液消耗體積計(jì)算還原糖量。
Ⅱ、儀器和試劑 1.儀器 酸式滴定管,可調(diào)電爐(帶石棉板),250ml容量瓶。 2.試劑1. 鹽酸。
2. 堿性酒石酸銅甲液:稱取15g硫酸銅(CuSO4·5H2O)及0.05g次甲基藍(lán),溶于水中并稀釋至1000mL。3. 堿性酒石酸銅乙液:稱取50g酒石酸鉀鈉與75g氫氧化鈉,溶于水中,再加入4g亞鐵氰化鉀,完全溶解后,用水稀釋至1000 ml,貯存于橡膠塞玻璃瓶內(nèi)。
4. 乙酸鋅溶液:稱取21.9 g乙酸鋅,加3ml冰乙酸,加水溶解并稀釋至100ml。5. 亞鐵氰化鉀溶液:稱取10.6g亞鐵氰化鉀,用水溶解并稀釋至100ml。
6. 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確稱取1.0000g經(jīng)過96℃±2℃干燥2h的純葡萄糖,加水溶解后加入5ml鹽酸,并以水稀釋至1000L。此溶液相當(dāng)于1mg/ml葡萄糖(注:加鹽酸的目的是防腐,標(biāo)準(zhǔn)溶液也可用飽和苯甲酸溶液配制)。
7. 果糖標(biāo)準(zhǔn)溶液:按⑹操作,配制每毫升標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)于1mg的果糖。8. 乳糖標(biāo)準(zhǔn)溶液:按⑹操作,配制每毫升標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)于1mg的乳糖。
9. 轉(zhuǎn)化糖標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確稱取1.0526g純蔗糖,用100ml水溶解,置于具塞三角瓶中加5ml鹽酸(1+1),在68℃~70℃水浴中加熱15min,放置至室溫定容至1000ml,每ml標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)于1.0mg轉(zhuǎn)化糖。Ⅲ、實(shí)驗(yàn)步驟 1.樣品處理 ⑴ 乳類、乳制品及含蛋白質(zhì)的食品:稱取約2.50~5.00g固體樣品(吸取25~50ml液體樣品),置于250 ml容量瓶中,加50 ml水,搖勻。
邊搖邊慢慢加入5ml乙酸鋅溶液及5ml亞鐵氫化鉀溶液,加水至刻度,混勻。靜置30 min,用干燥濾紙過濾,棄去初濾液,濾液備用。
(注意:乙酸鋅可去除蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、樹脂等,使它們形成沉淀,經(jīng)過濾除去。如果鈣離子過多時(shí),易與葡萄糖、果糖生成絡(luò)合物,使滴定速度緩慢;從而結(jié)果偏低,可向樣品中加入草酸粉,與鈣結(jié)合,形成沉淀并過濾。)
⑵ 酒精性飲料:吸取100ml樣品,置于蒸發(fā)皿中,用1 mol/L氫氧化鈉溶液中和至中性,在水浴上蒸發(fā)至原體積1/4后,移入250ml容量瓶中,加水至刻度。 ⑶ 含多量淀粉的食品:稱取10.00~20.00g樣品,置于250ml容量瓶中,加200ml水,在45℃水浴中加熱1h,并時(shí)時(shí)振搖(注意:此步驟是使還原糖溶于水中,切忌溫度過高,因?yàn)榈矸墼诟邷貤l件下可糊化、水解,影響檢測結(jié)果。)
冷后加水至刻度,混勻,靜置,沉淀。
吸取200ml上清液于另一250ml容量瓶中,慢慢加入5ml乙酸鋅溶液及5ml亞鐵氫化鉀溶液,加水至刻度,混勻,沉淀,靜置30 min,用干燥濾紙過濾,棄去初濾液,濾液備用。 ⑷ 汽水等含有二氧化碳的飲料:吸取100ml樣品置于蒸發(fā)皿中,在水浴上除去二氧化碳后,移入250ml容量瓶中,并用水洗滌蒸發(fā)皿,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混勻后備用。
(注意:樣品中稀釋的還原糖最終濃度應(yīng)接近于葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液的濃度。) 2. 標(biāo)定堿性酒石酸銅溶液:吸取5.0ml堿性酒石酸銅甲液及5.0ml乙液,置于150ml錐形瓶中(注意:甲液與乙液混合可生成氧化亞銅沉淀,應(yīng)將甲液加入乙液,使開始生成的氧化亞銅沉淀重溶),加水10 ml,加入玻璃珠2粒,從滴定管滴加約9 ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液或其他還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液,直至溶液蘭色剛好褪去為終點(diǎn),記錄消耗的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液或其他還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液總體積,平行操作。
可溶性總糖的測定
【實(shí)驗(yàn)原理】
本實(shí)驗(yàn)采用蒽酮比色法測定可溶性糖的含量。糖在硫酸作用下生成糠醛,糠醛再與蒽酮作用形成綠色絡(luò)合物,顏色的深淺與糖含量有關(guān)。在625 nm波長下的OD值與糖含量成正比。由于蒽酮試劑與糖反應(yīng)的呈色強(qiáng)度隨時(shí)間變化,故必須在反應(yīng)后立即在同一時(shí)間內(nèi)比色。該實(shí)驗(yàn)方法簡便,但沒有專一性,絕大部分的碳水化合物都能與蒽酮試劑反應(yīng),產(chǎn)生顏色。
【器材與試劑】
1. 實(shí)驗(yàn)儀器分光光度計(jì),恒溫水浴,電子天平,烘箱,刻度試管,漏斗
2. 實(shí)驗(yàn)試劑活性炭,乙醇
葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液:稱取已在80℃烘箱中烘至恒重的葡萄糖100
mg,用80%乙醇配制成1000 ml溶液,即得每ml含糖為100
μg的標(biāo)準(zhǔn)液
蒽酮試劑:稱取1 g
蒽酮,溶解于1000 ml稀硫酸(將760 ml相對密度為1.84的濃硫酸用蒸餾水稀釋成1000
ml)溶液中,置于棕色瓶中,當(dāng)日配置使用。
3. 實(shí)驗(yàn)材料植物葉片或種子
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1.
可溶性糖的提取
植物葉片或種子在110℃烘箱烘15
min,然后調(diào)至70℃過夜。干葉片磨碎后稱取50 mg樣品倒入10
ml刻度離心管內(nèi)加入4 ml 80%乙醇,置于80℃水浴中不斷攪拌40
min,離心,收集上清液,其殘?jiān)? ml 80%乙醇重復(fù)提2次,合并上清液。在上清液中加10
mg活性炭,80℃脫色30 min,80%乙醇定容至10
ml,過濾后取濾液測定。
2.
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
取20 ml帶塞試管,編號,按下表配置系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液。然后在每只試管中加入5
ml蒽酮試劑,混勻,蓋上塞子,在沸水浴中煮沸10
min(水浴重沸后計(jì)時(shí)),取出,立即用水冷卻至室溫,在625nm波長下,分別測量各管的光密度值,用0號管調(diào)零。以光密度為縱坐標(biāo),葡萄糖含量為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
不好意思,淀粉DE值的測定我不大懂,我的生物化學(xué)知識只局限于高中水平!DE值,是英文(dextrose equivalent)的縮寫,是葡萄糖當(dāng)量或葡萄糖值的意思。
淀粉的轉(zhuǎn)化程度以葡萄糖值表示(簡稱DE值), DE值=還原糖含量(以葡萄糖計(jì))/淀粉干物質(zhì)的量淀粉分解過程要求把淀粉全部分解,但又不完全分解為葡萄糖與麥芽糖,它還含有多種糖類的混合物。淀粉的水解過程是:淀粉-----糊精------高糖-----麥芽糖------葡萄糖下面是別人的方法,你可參考下:DE值的測定其實(shí)很簡單,主要測定方法如下:根據(jù)試樣還原糖的大小確定取樣量。
DE值等于試樣還原糖與試樣干固物之比,你首先將試樣的固形物測出來,如糖漿用阿貝折光儀測定,可直接讀取固形物含量;如是麥芽糊精,則測定其水分,用100%減去水分即為固形物含量。例如:有一糖漿,其固形物為75%,DE值為40%,那么其還還原糖為0.75乘以40%為30%,那么取樣就要取0.75~0.80g定容至250mL(使樣液中每mL含有還原糖 1mg)按GB/T 5009.7測定。
你也可以參考QB/T2319—1997,這里面就有關(guān)于DE值的測定。
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淀粉的國標(biāo)測定方法|
測定食物中淀粉的方法有酶水解法、酸水解法、可消化淀粉和抗性淀粉的測定方法(酶-直接法)一、酶水解法1.原理樣品經(jīng)除去脂肪及可溶性糖類后,其中淀粉用淀粉酶水解成雙糖,再用鹽酸將雙糖水解成單糖,最后按還原糖測定,并折算成淀粉。2.適用范圍GB5009.9-85,適用于所有含淀粉的食物。3.儀器(1) 回流冷凝器(2) 水浴鍋4.試劑除特殊說明外,實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水,試劑為分析純。(1) 乙醚(2) 0.5 % 淀粉酶溶液:稱取淀粉酶(Sigma公司, E.C3.2.1.1)0.5 g,加100ml水溶解,加入數(shù)滴甲苯或三氯甲烷,防止長霉,貯于冰箱中。(注:配成溶液的淀粉酶破壞很快,最好鄰用現(xiàn)配。)(3) 碘溶液:稱取3.6 g碘化鉀溶于20 ml水中,加入1.3 g碘,溶解后加水稀釋至100 ml。(4) 85 %乙醇。(5) 其余試劑同《蔗糖測定方法》5.操作方法5.1 樣品處理稱取2~5 g樣品,置于放有折疊濾紙的漏斗內(nèi),先用50 ml乙醚分5次洗除脂肪(注:如果脂肪含量少,此步驟可免),再用約100 ml85 %乙醇洗去可溶性糖類(注:此步驟目的是去除可溶性糖),將殘留物移入250 ml燒杯內(nèi),并用50ml水洗濾紙及漏斗,洗液并入燒杯內(nèi),將燒杯置沸水浴上加熱15 min,使淀粉糊化,放冷至60 ℃以下,加20ml淀粉酶溶液,再55~60 ℃保溫1h,并時(shí)時(shí)攪拌(注:溫度過高,淀粉酶的活性破壞)。然后取1滴此液加1滴碘溶液,應(yīng)不現(xiàn)蘭色,若顯蘭色,再加熱糊化并加20ml淀粉酶溶液,繼續(xù)保溫,直至加碘不顯蘭色為止
pro的測定方法分為兩大類:一類是利用pro的共性,即含氮量,肽鏈和折射率測定pro含量,另一類是利用蛋白質(zhì)中特定氨基酸殘基、酸、堿性基團(tuán)和芳香基團(tuán)測定pro含量。
但是食品種類很多,食品中pro含量又不同,特別是其他成分,如碳水化合物,脂肪和維生素的干擾成分很多,因此pro的測定通常利用經(jīng)典的剴氏定氮法是由樣品消化成銨鹽蒸餾,用標(biāo)準(zhǔn)酸液吸收,用標(biāo)準(zhǔn)酸或堿液滴定,由樣品中含氮量計(jì)算出pro的含量。由于食品中pro含量不同又分為凱氏定氮常量法、半微量法和微量法,但它們的基本原理都是一樣的。
用于制備淀粉的原料主要有薯類、玉米、小麥、大米等富含淀粉的農(nóng)產(chǎn)品。
根據(jù)原料淀粉的性質(zhì)及采用的催化劑不同,淀粉水解為葡萄糖的方法有酸解法、酶解法以及酸酶結(jié)合法等三種。 酶解法是在酶的作用下進(jìn)行的,反應(yīng)條件較溫和,不需要耐高溫高壓或 而酸腐蝕的設(shè)備;酶作為催化劑的特點(diǎn)是專一性強(qiáng),副反應(yīng)少,故水解糖液純度高,淀粉轉(zhuǎn)化率高;可在較高的淀粉乳濃度下水解。
如酸解法一般使用10-12Bx(含18%--20%淀粉)的淀粉乳,而酶解法可用20—23Bx(含34%--40%淀粉)的淀粉乳,并且可以采用粗原料。用酶解法制得的糖液較純凈、顏色淺、無苦味、質(zhì)量高,有利于糖液的充分利用。
酶解法反應(yīng)時(shí)間較長,設(shè)備要求較多,且酶是蛋白質(zhì),易引起糖液過濾困難。當(dāng)然,隨著酶制劑生產(chǎn)及應(yīng)用技術(shù)的提高,酶解法制糖將逐漸取代酸解法制糖。
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