工業(yè)化培養(yǎng)細(xì)菌的方法(細(xì)菌培養(yǎng)的方法)

1.細(xì)菌培養(yǎng)的方法有哪些

根據(jù)培養(yǎng)細(xì)菌的目的和培養(yǎng)物的特性培養(yǎng)方法分為一般培養(yǎng)法、二氧化碳培養(yǎng)法和厭氧培養(yǎng)法三種。

1、一般培養(yǎng)法：將已接種過的培養(yǎng)基，置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)18-24小時(shí)，需氧菌和兼性厭氧菌即可于培養(yǎng)基上生長。少數(shù)生長緩慢的細(xì)菌，需培養(yǎng)3-7天直至一個(gè)月才能生長。

為使培養(yǎng)箱內(nèi)保持一定濕度，可在其內(nèi)放置一杯水。培養(yǎng)時(shí)間較長的培養(yǎng)基，接種后應(yīng)將試管口塞棉塞后用石臘凡士林封固，以防培養(yǎng)基干裂。

2、二氧化碳培養(yǎng)法：某些細(xì)菌，如牛流產(chǎn)布氏桿菌和胎兒弧菌等需要在含有10%二氧化碳的空氣中才能生長，尤其是初代分離培養(yǎng)要求更為嚴(yán)格。將已接種的培養(yǎng)基置于二氧化碳環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)的方法即二氧化碳培養(yǎng)法，

3、厭氧培養(yǎng)法：常用的厭氧培養(yǎng)方法有厭氧罐法、氣袋法及厭氧箱三種。

擴(kuò)展資料：

培養(yǎng)時(shí)應(yīng)根據(jù)細(xì)菌種類和目的等選擇培養(yǎng)方法、培養(yǎng)基，制定培養(yǎng)條件（溫度、pH值、時(shí)間，對氧的需求與否等）。

一般操作步驟為先將標(biāo)本接種于固體培養(yǎng)基上，做分離培養(yǎng)。再進(jìn)一步對所得單個(gè)菌落進(jìn)行形態(tài)、生化及血清學(xué)反應(yīng)鑒定。培養(yǎng)基常用牛肉湯、蛋白胨、氯化鈉、葡萄糖、血液等和某些細(xì)菌所需的特殊物質(zhì)配制成液體、半固體、固體等。

一般細(xì)菌可在有氧條件下，37℃中放18~24小時(shí)生長。厭氧菌則需在無氧環(huán)境中放2~3天后生長。個(gè)別細(xì)菌如結(jié)核菌要培養(yǎng)1個(gè)月之久。

通過日常管理、檢測、檢查，了解光合細(xì)菌的生長情況，就可以結(jié)合當(dāng)時(shí)環(huán)境條件的變化進(jìn)行分析，找出影響光合細(xì)菌生長繁殖的原因，采取相應(yīng)的措施。影響光合細(xì)菌生長的原因很多，內(nèi)因是菌種是否優(yōu)良，外因是光照、溫度、營養(yǎng)、敵害和厭氣程度等。

溫度、光照和pH值都能影響著光合細(xì)菌的生長，而且溫度、光照和pH值之間是互相制約的，溫度與光照的強(qiáng)弱是對立統(tǒng)一的，所以光合細(xì)菌生長的最適條件應(yīng)是互應(yīng)的，即溫度高，光照應(yīng)弱；溫度低，光照應(yīng)強(qiáng)。

如果是溫度高，光照強(qiáng)，pH值就會迅速升高，培養(yǎng)基產(chǎn)生沉淀，抑制光臺細(xì)菌的生長；如果溫度低，光照弱，光合細(xì)菌得不到最佳能源，生長速度也慢。經(jīng)試驗(yàn)得出光合細(xì)菌生長的最適條件是：

①溫度15~20℃時(shí)，光照30000~50000lx，培養(yǎng)基pH值為7.0;

②溫度25~30℃時(shí)，光照為3000~5000lx，培養(yǎng)基的pH值為7.0。

參考資料來源：搜狗百科——細(xì)菌培養(yǎng)

2.微生物的培養(yǎng)方法有哪些

1905年，德國微生物學(xué)家科赫因?qū)Y(jié)核桿菌和結(jié)核菌素的研究取得重大成就而榮獲諾貝爾獎金。

他發(fā)明固體培養(yǎng)基，用它分離培養(yǎng)細(xì)菌，創(chuàng)造細(xì)菌的純粹培養(yǎng)法。他又改進(jìn)細(xì)菌染色法，為研究細(xì)菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)創(chuàng)造有利條件。

荷蘭科學(xué)家E.C.翰遜教授研究使啤酒發(fā)酵的酵母，創(chuàng)造單細(xì)胞的純粹培養(yǎng)法。以后，又有人采用純粹培養(yǎng)法選擇適當(dāng)酵母，用于啤酒的工業(yè)生產(chǎn)，為純粹培養(yǎng)法在工業(yè)發(fā)酵上的應(yīng)用開辟了道路。

翰遜的學(xué)生哈斯發(fā)現(xiàn)，當(dāng)時(shí)用的由明膠制成的固體培養(yǎng)基很容易發(fā)生液化現(xiàn)象，使用時(shí)有困難。哈斯的妻子建議用瓊脂代替明膠，獲得了較好的效果。

這種瓊脂培養(yǎng)基被后人采用，一直沿用到今天。后來又有人創(chuàng)造一種培養(yǎng)皿，可供微生物平板分離用。

從此以后，分離出的微生物日益增多，新的微生物不斷被發(fā)現(xiàn)。這樣，可供工業(yè)用的微生物也日益充實(shí)起來，一支微生物生力軍異軍突起。

3.細(xì)菌分離培養(yǎng)的基本要領(lǐng)和常用方法有哪些

一、基本要領(lǐng)

菌種分離主要在培養(yǎng)皿上進(jìn)行，常用的方法是稀釋法和劃線法。

菌種分離的目的是是微生物的一個(gè)個(gè)體通過繁殖，在固體培養(yǎng)基上長出肉眼能見的群體，然后根據(jù)培養(yǎng)特征，用接種針調(diào)取所需菌種并在顯微鏡下檢查，證明為單一形狀的菌體。

改變培養(yǎng)基條件也有助于菌種分離。沒有一種培養(yǎng)基或一種培養(yǎng)條件能夠滿足一切微生物生長的需要，在一定程度上所有的培養(yǎng)基都是選擇性的。

如果某種微生物的生長需要是已知的，也可以設(shè)計(jì)特定環(huán)境使之適合這種微生物的生長，因而能夠從混雜的微生物群體中把這種微生物選擇培養(yǎng)出來，盡管在混雜的微生物群體中這種微生物可能只占少數(shù)。

二、方法

1、稀釋倒平板法

首先把微生物懸液作一系列的稀釋（如1:10、1:100、1:1000、1:10000），然后分別取不同稀釋液少許，與已熔化并冷卻至50℃左右的瓊脂培養(yǎng)基混合，搖勻后，傾入滅過菌的培養(yǎng)皿中，待瓊脂凝固后，制成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養(yǎng)一定時(shí)間即可出現(xiàn)菌落。

如果稀釋得當(dāng)，在平板表面或瓊脂培養(yǎng)基中就可出現(xiàn)分散的單個(gè)菌落，這個(gè)菌落可能就是由一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖形成的。隨后挑取該單個(gè)菌落，或重復(fù)以上操作數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)。

2、涂布平板法

因?yàn)閷⑽⑸飸乙合燃拥捷^燙的培養(yǎng)基中再倒平板易造成某些熱敏感菌的死亡，且采用稀釋倒平板法也會使一些嚴(yán)格好氧菌因被固定在瓊脂中間缺乏氧氣而影響其生長，因此在微生物學(xué)研究中常用的純種分離方法是涂布平板法。

其做法是先將已熔化的培養(yǎng)基倒入無菌平皿，制成無菌平板，冷卻凝固后，將一定量的微生物懸液滴加在平板表面，再用無菌玻璃涂棒將菌液均勻分散至整個(gè)平板表面，經(jīng)培養(yǎng)后挑取單個(gè)菌落。

3、平板劃線法

最簡單的分離微生物的方法是平板劃線法，即用接種環(huán)以無菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進(jìn)行連續(xù)劃線，微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落。

有時(shí)這種單菌落并非都由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來的，故必須反復(fù)分離多次才可得到純種。其原理是將微生物樣品在固體培養(yǎng)基表面多次作“由點(diǎn)到線”稀釋而達(dá)到分離目的的。劃線的方法很多，常見的比較容易出現(xiàn)單個(gè)菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、放射法、四格法等。

4、稀釋搖管法

用固體培養(yǎng)基分離嚴(yán)格厭氧菌有特殊性，如果該微生物暴露于空氣中不立即死亡，可以采用通常的方法制備平板，然后置放在封閉的容器中培養(yǎng)，容器中的氧氣可采用化學(xué)、物理或生物的方法清除。

對于那些對氧氣更為敏感的厭氧性微生物，純培養(yǎng)的分離則可采用稀釋搖管培養(yǎng)法進(jìn)行，它是稀釋倒平板法的一種變通形式。

先將一系列盛無菌瓊脂培養(yǎng)基的試管加熱使瓊脂熔化后冷卻并保持在50℃左右，將待分離的材料用這些試管進(jìn)行梯度稀釋，試管迅速搖動均勻，冷凝后，在瓊脂柱表面傾倒一層滅菌液體石蠟和固體石蠟的混合物，將培養(yǎng)基和空氣隔開。

培養(yǎng)后，菌落形成在瓊脂柱的中間。進(jìn)行單菌落的挑取和移植，需先用一只滅菌針將液體石蠟--石蠟蓋取出，再用一只毛細(xì)管插入瓊脂和管壁之間，吹入無菌無氧氣體，將瓊脂柱吸出，置放在培養(yǎng)皿中，用無菌刀將瓊脂柱切成薄片進(jìn)行觀察和菌落的移植。

擴(kuò)展資料

在以上介紹的幾種方法中，平板分離法普遍用于實(shí)驗(yàn)室微生物的分離與純化，稀釋法是液體培養(yǎng)基分離純化常用的方法。

一般情況下可以通過適當(dāng)改善培養(yǎng)基的條件來培養(yǎng)特點(diǎn)菌種。

如為了得到嗜熱微生物，可在50℃~60℃下進(jìn)行培養(yǎng)。有時(shí)投加相應(yīng)的抑制劑也能提高菌種分離效果，如在土壤樣品的懸浮液中投加10%的苯酚數(shù)滴，可以抑制霉菌和細(xì)菌的生長，而有利于放線菌的分離。在培養(yǎng)基中投加一定量的青霉素或鏈霉素能抑制細(xì)菌的生長，而有利于霉菌的分離。

參考資料來源：搜狗百科-菌種分離

4.“細(xì)菌培養(yǎng)”的具體培養(yǎng)步驟是什么

以光合細(xì)菌培養(yǎng)方法為例。光合細(xì)菌培養(yǎng)的方法，按次序分為容器、工具的消毒， 培養(yǎng)基的制備，接種和培養(yǎng)管理四個(gè)步驟。

（一）容器、工具的消毒參考、此處從略。

（二）培養(yǎng)基的制備

1.培養(yǎng)用水

如果培養(yǎng)的光合細(xì)菌是淡水種，菌種培養(yǎng)可用蒸餾水，生產(chǎn)培養(yǎng)可用消毒的自來水（或井水）配制。如果培養(yǎng)的光合細(xì)菌是海水種，則用天然海水配制培養(yǎng)基，注意在海水中加入磷元素時(shí)，不能用 磷酸氫二鉀，應(yīng)用 磷酸二氫鉀，不然會產(chǎn)生大量沉淀。

2.滅菌和消毒菌種培養(yǎng)用的培養(yǎng)基應(yīng)連同培養(yǎng)容器用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌。小型生產(chǎn)性培養(yǎng)可把配好的培養(yǎng)液用普通鋁鍋或大型三角燒瓶煮沸消毒。大型生產(chǎn)性培養(yǎng)則把經(jīng)沉淀砂濾后的水用漂白粉（或漂白液）消毒后使用。

3. 培養(yǎng)基配制根據(jù)所培養(yǎng)種類的營養(yǎng)需要選擇合適的培養(yǎng)基配方。按培養(yǎng)基配方把所需物質(zhì)稱量，逐一溶解，混合，配成培養(yǎng)基。也可先配成母液，使用時(shí)按比例加入一定的量即可。

（三）接種培養(yǎng)基配好后，應(yīng)立即進(jìn)行接種。光合細(xì)菌生產(chǎn)性培養(yǎng)的按種量比較高，一般為20%~50%，即菌種 母液量和新配 培養(yǎng)液雖之比為1∶4~1∶1，不應(yīng)低于20%，尤其是微氣培養(yǎng)，接種量更應(yīng)高些，否則光合細(xì)菌在培養(yǎng)液中很難占絕對優(yōu)勢，影響培養(yǎng)的最終產(chǎn)量和質(zhì)量。

（四）培養(yǎng)管理光合細(xì)菌的培養(yǎng)過程中，管理工作包括日常管理操作和測試，生長情況的觀察、檢查以及出現(xiàn)問題的分析處理等三個(gè)方面。

根據(jù)臨床初步診斷及待檢細(xì)菌的種類，可選用不同環(huán)境條件進(jìn)行培養(yǎng)。常用的有需氧培養(yǎng)法、二氧化碳培養(yǎng)法和厭氧培養(yǎng)法。為了提高檢驗(yàn)的正確率，同一標(biāo)本常同時(shí)采用兩種或三種不同的培養(yǎng)法。

（一）需氧培養(yǎng)法

本法是臨床細(xì)菌室最常用的培養(yǎng)方法，適于一般需氧和兼性厭氧菌的培養(yǎng)。將已接種好的平板、斜面和液體培養(yǎng)基等，置于35℃溫箱中孵育18~24h，一般細(xì)菌可于培養(yǎng)基上生長，但有些難以生長的細(xì)菌需培養(yǎng)更長的時(shí)間才能生長。另外，有的細(xì)菌最適生長溫度是28℃~30℃，如鼠疫耶爾森菌，甚至在4℃也能生長，如李斯特菌。

（二）二氧化碳培養(yǎng)法

有些細(xì)菌初次分離培養(yǎng)時(shí)須置5%~l0%C02環(huán)境才能生長良好，如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌，牛布魯菌等。常以下列方法供給C02。

1.二氧化碳培養(yǎng)箱：是一臺特制的培養(yǎng)箱，既能調(diào)節(jié)C02的含量，又能調(diào)節(jié)所需的溫度。C02從鋼瓶通過培養(yǎng)箱的C02，運(yùn)送管進(jìn)入培養(yǎng)箱內(nèi)，調(diào)節(jié)好所需C02，濃度自動控制器后，將接種好的培養(yǎng)基直接放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)即可。此法適于大型實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。

2.燭缸法：將已接種好的培養(yǎng)基置干燥器內(nèi)，并放入點(diǎn)燃的蠟燭。干燥器蓋的邊緣涂上凡士林，蓋上蓋子，燭光經(jīng)幾分鐘后自行熄滅，此時(shí)干燥器內(nèi)C02含量約占5%~l0%，然后將干燥器放入35℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)時(shí)間一般為18~24h，少數(shù)菌種需培養(yǎng)3~7天或更長。

3.化學(xué)法：按每升容積加入碳酸氫鈉0.49和濃鹽酸0.35ml的比例，分別置于容器內(nèi)。將容器連同接種好的培養(yǎng)基都放人干燥器內(nèi)，蓋緊干燥器的蓋子，傾斜容器使?jié)恹}酸與碳酸氫鈉接觸生成C02。

（三）厭氧培養(yǎng)法

適用于專性厭氧菌和兼性厭氧菌的培養(yǎng)。常用的厭氧培養(yǎng)法有：①皰肉培養(yǎng)基法；②焦性沒食子酸法；③厭氧罐法；④氣袋法；⑤厭氧手套箱法。

5.細(xì)菌分離培養(yǎng)的方法有哪些

細(xì)菌分離培養(yǎng)的方法有哪些

如果是液體培養(yǎng)基，那分離起來就比較困難，要用到專門的凍干設(shè)備，還要加很多柔和的保護(hù)性物質(zhì)。 所以在一般的情況下最好的辦法是把細(xì)菌接種到固體培養(yǎng)基上，這樣長出來的菌落或菌苔就是你所要分離出的細(xì)菌了。

原理：通過在平板上劃線，將混雜的細(xì)菌在瓊脂平板表面充分的分散開，使單個(gè)細(xì)菌能固定在一點(diǎn)上生長繁殖，形成單個(gè)菌落，以達(dá)到分離純種的目的。若需從平板上獲取純種，則挑取一個(gè)單個(gè)菌落作純培養(yǎng)。

6.工業(yè)微生物產(chǎn)生菌的分離篩選方法有哪些

1.(1)從亞硝酸鹽含量較高的環(huán)境中采集土樣；（2）配置培養(yǎng)基，制備平板，一種僅以亞硝酸鹽作為唯一氮源（a），另一種不含任何氮源作為對照（b）;(3)將樣品適當(dāng)稀釋（十倍稀釋法），涂布a平板；（4）將平板至于適當(dāng)溫度條件下培養(yǎng)，觀察是否有菌落產(chǎn)生；（5）將a平板上的菌落編號并分別轉(zhuǎn)接至b平板，至于相同溫度條件下培養(yǎng)；（6）挑去在a平板上生長而不在b平板上生長的菌落，在一個(gè)新的a平板上劃線、培養(yǎng)，獲得單菌落，初步確定為可利用亞硝酸鹽作為唯一氮源的微生物除培養(yǎng)

2.a將他們混合培養(yǎng)，在培養(yǎng)基上長出的菌落為重組菌株。b如果在混合培養(yǎng)期間加入dnaase，在培養(yǎng)基上無重組菌落出現(xiàn)這說明上述重組是因細(xì)胞間的接觸轉(zhuǎn)化所致；如果仍有重組菌落長生，說明可能是由于接合和轉(zhuǎn)導(dǎo)所致。c利用只能持留細(xì)菌的濾板相隔的u型管進(jìn)行試驗(yàn)，如果在基本培養(yǎng)基上不產(chǎn)生重組菌落，則判斷為接合作用，如果產(chǎn)生重組菌落，則又有兩種可能，即轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)。d利用能持留細(xì)菌和細(xì)菌病毒而不能持留dna的濾板相隔的u型管進(jìn)行試驗(yàn)，如果不產(chǎn)生重組菌落則為轉(zhuǎn)導(dǎo)，如果仍產(chǎn)生重組菌落則為轉(zhuǎn)化