誘導動(dòng)物細胞融合的方法(4誘導細胞融合的方法)
1.4、誘導細胞融合的方法有哪些
(1)物理融合的機制
20世紀80年代發(fā)明了電融合技術(shù)。此方法是先將兩種原生質(zhì)體以適當的比例制成細胞懸液，將其滴入電融合小室中，給小室兩極以交變電流，使原生質(zhì)體沿電場(chǎng)方向聚集成串珠狀，接著(zhù)給以瞬間高強度的電脈沖，使原生質(zhì)體膜產(chǎn)生局部破損而融合。
(2)化學(xué)融合的機制
現通常使用聚乙二醇（PEG）作為融合劑。PEG可以破環(huán)細胞間相互排斥的表面作用力，從而使相鄰細胞聚集而促進(jìn)融合。另外，化學(xué)融合方法還有高pH高Ca2+法，其基本原理是中和原生質(zhì)體表面所帶電荷，使原生質(zhì)體的質(zhì)膜緊密接觸，從而有利于質(zhì)膜的接觸融合。
(3)滅火病毒誘導的細胞融合的機制
此方法適用于動(dòng)物細胞的融合。通常使用滅火的仙臺病毒。利用滅火的病毒能使細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)重新排布，細胞膜打開(kāi)，細胞發(fā)生融合。在誘導細胞發(fā)生融合前，必須先用紫外線(xiàn)將病毒滅火，再稀釋到一定濃度后加入到細胞懸液中誘導細胞融合。
2.動(dòng)物細胞融合的方法
還有：震動(dòng)，病毒。
誘導細胞融合的方法有三種：生物方法（病毒）、化學(xué)方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（離心，震動(dòng)，電刺激）。某些病毒如：仙臺病毒、副流感病毒和新城雞瘟病毒的被膜中有融合蛋白（fusion protein），可介導病毒同宿主細胞融合，也可介導細胞與細胞的融合，因此可以用紫外線(xiàn)滅活的此類(lèi)病毒誘導細胞融合。化學(xué)和物理方法可造成膜脂分子排列的改變，去掉作用因素之后，質(zhì)膜恢復原有的有序結構，在恢復過(guò)程中便可誘導相接觸的細胞發(fā)生融合。
培養基的差異：動(dòng)物細胞的培養基是液體培養基、血清培養基，而植物培養基是固體培養基。
以下是動(dòng)物培養基和植物培養基的具體內容：
動(dòng)物培養基：
1.動(dòng)物細胞培養液的成分：葡萄糖、氨基酸、無(wú)機鹽、維生素和動(dòng)物血清等。動(dòng)物細胞培養成功的關(guān)鍵在于培養液中是否含有動(dòng)物血清，因為由于動(dòng)物細胞生活的內環(huán)境還有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入動(dòng)物血清以提供一個(gè)類(lèi)似生物體內的環(huán)境，此外動(dòng)物血清中也包含了一些動(dòng)物的激素和酶，可以促進(jìn)細胞的發(fā)育。
2.動(dòng)物細胞培養液的特點(diǎn)：液體培養基、含動(dòng)物血清。
植物培養基：
( 1 )愈傷組織誘導培養基： MS 培養基（蔗糖含量為 10 g/L , 2,4 – D 含量為 2 mg/L ，瓊脂 10 g/L ）。
( 2 )試驗培養基：在 MS 培養基中加入 IAA 和 6–BA 。
吲哚乙酸（IAA）先用少量 0.1 mol/L NaOH 溶解， 6- 芐基氨基腺嘌呤先用少量 0.1 mol/L HCl 溶解，然后用蒸餾水稀釋?zhuān)偌尤肱囵B基中。
希望能幫助您。^__^
3.可以誘導動(dòng)物細胞融合的方法有（ ）A.加有機溶劑B.使用病毒C.使用電
有性繁殖時(shí)發(fā)生的精卵結合是正常的細胞融合，即由兩個(gè)配子融合形成一個(gè)新的二倍體.在自然條件下或用人工方法（生物的、物理的、化學(xué)的）使兩個(gè)或兩個(gè)以上的細胞合并形成一個(gè)細胞的過(guò)程.人工誘導的細胞融合，在六十年代作為一門(mén)新興技術(shù)而發(fā)展起來(lái).由于它不僅能產(chǎn)生同種細胞融合，也能產(chǎn)生種間細胞的融合，因此細胞融合技術(shù)目前被廣泛應用于細胞生物學(xué)和醫學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域. 基因型相同的細胞融合成的雜交細胞稱(chēng)為同核體；來(lái)自不同基因型的雜交細胞則稱(chēng)為異核體.細胞融合的具體步驟包括：（1）細胞準備，分貼壁和懸浮細胞兩種.前者可直接將兩親本細胞混合培養，后者需制成一定濃度的細胞懸浮液.（2）細胞融合，加促融因子于將行融合的細胞之中，誘導融合.（3）雜種細胞選擇.利用選擇性培養基等，使親本細胞死亡，而讓雜種細胞存活.（4）雜種細胞克隆.對選出的雜種細胞進(jìn)行克隆（選擇與純化），經(jīng)過(guò)培養，就能獲得所需要的無(wú)性繁殖系.故選；BC.。
