果膠酶活性測(cè)定(測(cè)定果膠酶的活性時(shí),應(yīng)給予最適溫度和什么?)
1.測(cè)定果膠酶的活性時(shí),應(yīng)給予最適溫度和什么?
A、探究果膠酶的最適溫度時(shí)，需將底物和酶分別在同等溫度下處理后再混合，目的是控制單一變量，而無關(guān)變量要相同且適宜.故A對(duì).
B、高溫、過酸、過堿都會(huì)破壞酶的空間結(jié)構(gòu)使酶失活，酶的活性不能恢復(fù).低溫使酶失活，但沒有破壞酶的空間結(jié)構(gòu)，酶的活性可以恢復(fù).故B錯(cuò).
C、酶作為催化劑在化學(xué)反應(yīng)前后本身的性質(zhì)、數(shù)量不變，發(fā)揮作用后還留在產(chǎn)物中.在探究果膠酶的最適溫度和最適PH實(shí)驗(yàn)中，為了不影響后續(xù)反應(yīng)的進(jìn)行，待酶作用完后立即煮沸失活.故C對(duì).
D、間接之間用氫鍵連接，解旋酶是一類解開氫鍵的酶.故D對(duì).
故選：B.
2.酶活力測(cè)定的注意事項(xiàng)有哪些
1.底物濃度 除選擇適合的底物外，在實(shí)際應(yīng)用中更多考慮的是底物濃度。由于[S]與反應(yīng)速度V成雙曲線關(guān)系，在酶活性測(cè)定時(shí)，要求[S]達(dá)到一定水平以保證酶活性與酶量成正比。[S]范圍一般選擇在10~20Km為宜，此時(shí)反應(yīng)速度基本達(dá)到最大反應(yīng)速度，測(cè)定的誤差在可接受范圍。
2.酶濃度 在反應(yīng)條件一定時(shí)，酶濃度與反應(yīng)速度成正比。按照中間產(chǎn)物學(xué)說，只有[S]>>[E]時(shí)，酶才能被底物分子飽和，反應(yīng)速度才能達(dá)到最大值。因此當(dāng)標(biāo)本酶活力過高時(shí)，應(yīng)將標(biāo)本適當(dāng)稀釋后再加以測(cè)定。
3.溫度 不同的酶最適溫度可以不同，多數(shù)酶的最適溫度在37~40℃，高于或低于最適溫度，酶活性都降低。目前，酶活性的測(cè)定溫度尚未統(tǒng)一，但常規(guī)實(shí)驗(yàn)室多使用37℃。溫度對(duì)酶促反應(yīng)的影響程度通常用溫度系數(shù)（Q10）表示。溫度系數(shù)指溫度每升高10℃，化學(xué)反應(yīng)速度增加的倍數(shù)。Q10通常為l~2。由溫度系數(shù)得知，溫度的變化對(duì)酶活性有著重要影響，因此要求酶活性測(cè)定要在恒溫條件下進(jìn)行，溫度波動(dòng)要控制在±1℃。
4.離子強(qiáng)度和pH值 在最適pH時(shí)，酶的活性最強(qiáng)，高于或低于最適pH，酶的活性都降低，多數(shù)酶的最適pH在5~8之間。在測(cè)定酶活性時(shí)，要求緩沖液具有足夠的緩沖容量，以便使pH值保持穩(wěn)定。血漿或血清標(biāo)本含有多種緩沖溶質(zhì)，具有較強(qiáng)的緩沖能力。為了防止血漿或血清標(biāo)本緩沖溶質(zhì)對(duì)反應(yīng)液酸堿度的影響，使pH不致偏離設(shè)定值，標(biāo)本用量不宜過大，血漿或血清標(biāo)本體積/反應(yīng)液體積≤1/10為宜。
5 輔助因子 某些金屬離子和維生素類輔酶是結(jié)合酶的輔助因子，例如Zn2+是羧基肽酶的輔基，Mo6+是黃嘌呤氧化酶的輔基，NADH是不需氧脫氫酶的輔酶。這些酶離開它們的輔基或輔酶就不能表現(xiàn)活性，因此在酶活性測(cè)定時(shí)，就要保證輔基或輔酶的供給。
6.激活劑 有些酶在有激活劑存在時(shí)才有活性或活性較高，例如Mg2+是肌酸激酶的激活劑，Cl-是淀粉酶的激活劑。因此在酶活性測(cè)定時(shí)，也要滿足酶對(duì)激活劑的需要。
7.抑制劑 酶的抑制可分為不可逆抑制和可逆抑制，后者又可分為競(jìng)爭(zhēng)性抑制和非競(jìng)爭(zhēng)性抑制。重金屬離子和砷化物對(duì)巰基酶的抑制、有機(jī)磷對(duì)羥基酶的抑制屬于不可逆抑制；丙二酸對(duì)琥珀酸脫氫酶的抑制、磺胺類藥物對(duì)二氫葉酸合成酶的抑制屬于競(jìng)爭(zhēng)性抑制；哇巴因?qū)a+,K+-ATP酶的抑制屬于非競(jìng)爭(zhēng)性抑制。抑制劑使酶活性降低，在測(cè)定酶活性時(shí)，應(yīng)避免抑制劑的影響。
綜上所述，測(cè)定酶活性時(shí)，最適條件的選擇應(yīng)該遵循最適底物濃度、最適溫度、最適pH值、滿足輔助因子和激活劑、避免抑制劑的原則。
3.酶活力測(cè)定的注意事項(xiàng)有哪些?
1.底物濃度 除選擇適合的底物外，在實(shí)際應(yīng)用中更多考慮的是底物濃度。由于[S]與反應(yīng)速度V成雙曲線關(guān)系，在酶活性測(cè)定時(shí)，要求[S]達(dá)到一定水平以保證酶活性與酶量成正比。[S]范圍一般選擇在10~20Km為宜，此時(shí)反應(yīng)速度基本達(dá)到最大反應(yīng)速度，測(cè)定的誤差在可接受范圍。
2.酶濃度 在反應(yīng)條件一定時(shí)，酶濃度與反應(yīng)速度成正比。按照中間產(chǎn)物學(xué)說，只有[S]>>[E]時(shí)，酶才能被底物分子飽和，反應(yīng)速度才能達(dá)到最大值。因此當(dāng)標(biāo)本酶活力過高時(shí)，應(yīng)將標(biāo)本適當(dāng)稀釋后再加以測(cè)定。
3.溫度 不同的酶最適溫度可以不同，多數(shù)酶的最適溫度在37~40℃，高于或低于最適溫度，酶活性都降低。目前，酶活性的測(cè)定溫度尚未統(tǒng)一，但常規(guī)實(shí)驗(yàn)室多使用37℃。溫度對(duì)酶促反應(yīng)的影響程度通常用溫度系數(shù)（Q10）表示。溫度系數(shù)指溫度每升高10℃，化學(xué)反應(yīng)速度增加的倍數(shù)。Q10通常為l~2。由溫度系數(shù)得知，溫度的變化對(duì)酶活性有著重要影響，因此要求酶活性測(cè)定要在恒溫條件下進(jìn)行，溫度波動(dòng)要控制在±1℃。
4.離子強(qiáng)度和pH值 在最適pH時(shí)，酶的活性最強(qiáng)，高于或低于最適pH，酶的活性都降低，多數(shù)酶的最適pH在5~8之間。在測(cè)定酶活性時(shí)，要求緩沖液具有足夠的緩沖容量，以便使pH值保持穩(wěn)定。血漿或血清標(biāo)本含有多種緩沖溶質(zhì)，具有較強(qiáng)的緩沖能力。為了防止血漿或血清標(biāo)本緩沖溶質(zhì)對(duì)反應(yīng)液酸堿度的影響，使pH不致偏離設(shè)定值，標(biāo)本用量不宜過大，血漿或血清標(biāo)本體積/反應(yīng)液體積≤1/10為宜。
5 輔助因子 某些金屬離子和維生素類輔酶是結(jié)合酶的輔助因子，例如Zn2+是羧基肽酶的輔基，Mo6+是黃嘌呤氧化酶的輔基，NADH是不需氧脫氫酶的輔酶。這些酶離開它們的輔基或輔酶就不能表現(xiàn)活性，因此在酶活性測(cè)定時(shí)，就要保證輔基或輔酶的供給。
6.激活劑 有些酶在有激活劑存在時(shí)才有活性或活性較高，例如Mg2+是肌酸激酶的激活劑，Cl-是淀粉酶的激活劑。因此在酶活性測(cè)定時(shí)，也要滿足酶對(duì)激活劑的需要。
7.抑制劑 酶的抑制可分為不可逆抑制和可逆抑制，后者又可分為競(jìng)爭(zhēng)性抑制和非競(jìng)爭(zhēng)性抑制。重金屬離子和砷化物對(duì)巰基酶的抑制、有機(jī)磷對(duì)羥基酶的抑制屬于不可逆抑制；丙二酸對(duì)琥珀酸脫氫酶的抑制、磺胺類藥物對(duì)二氫葉酸合成酶的抑制屬于競(jìng)爭(zhēng)性抑制；哇巴因?qū)a+,K+-ATP酶的抑制屬于非競(jìng)爭(zhēng)性抑制。抑制劑使酶活性降低，在測(cè)定酶活性時(shí)，應(yīng)避免抑制劑的影響。
綜上所述，測(cè)定酶活性時(shí)，最適條件的選擇應(yīng)該遵循最適底物濃度、最適溫度、最適pH值、滿足輔助因子和激活劑、避免抑制劑的原則。
4.測(cè)定酶活性時(shí)應(yīng)注意些什么?
酶的活性測(cè)定要求有適宜的特定反應(yīng)條件，應(yīng)注意影響酶促反應(yīng)速度的各種因素應(yīng)該相對(duì)恒定。
1.酶的樣品應(yīng)做適當(dāng)?shù)奶幚怼?.反應(yīng)體系中，底物的量足夠使酶被底物飽和，以充分反映待測(cè)酶的活力。
但過高的底物濃度可能抑制酶的活性，一般底物濃度在10km以上。3.測(cè)定代謝物時(shí)應(yīng)保持酶的足夠濃度。
4.應(yīng)根據(jù)反應(yīng)時(shí)間選擇反應(yīng)的最適溫度。5.根據(jù)不同的底物和緩沖液選擇反應(yīng)的最適pH。
6.為獲取最高反應(yīng)速度，在反應(yīng)體系中應(yīng)含有適宜的輔助因子，激活劑等。7.測(cè)定酶活性時(shí)應(yīng)測(cè)定酶促反應(yīng)的初速度。
5.果膠酶 測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)
果膠酶活性的檢測(cè)
[目的]
本檢測(cè)方法是用來果膠酶的催化活性。本方法適用于各種固體和液體果膠酶制劑。
[說明]
本方法適合于果膠酶的質(zhì)量分析和質(zhì)量控制領(lǐng)域。但不是本公司產(chǎn)品及其它公司產(chǎn)品的絕對(duì)活力的預(yù)測(cè)，而各種酶制劑的最終的酶活力在良好的實(shí)驗(yàn)操作下仍可發(fā)揮出更好的催化活力。
[原理]
果膠物質(zhì)主要存在于植物初生壁和細(xì)胞中間，果膠物質(zhì)是細(xì)胞壁的基質(zhì)多糖。果膠包括兩種酸性多糖（聚半乳糖醛酸、聚鼠李半乳糖醛酸）和三種中性多糖（阿拉伯聚糖、半乳聚糖、阿拉伯半乳聚糖）。果膠酶本質(zhì)上是聚半乳糖醛酸水解酶，果膠酶水解果膠主要生成β-半乳糖醛酸，可用次碘酸鈉法進(jìn)行半乳醛酸的定量，從而測(cè)定果膠酶活力。
[果膠酶活力單位定義]
1g（或1ml液體酶）酶粉，于50.0℃、pH3.5條件下，每分鐘催化果膠水解生成1微克半乳糖醛酸的酶量為一個(gè)活力單位。
1. 試劑和儀器
*本標(biāo)準(zhǔn)所使用所有的試劑若無任何說明，均為分析純
1.1 醋酸
1.2 碘
1.3 碘花鉀
1.4 濃硫酸
1.5 果膠（sigma公司）
1.6 硫代硫酸鈉
1.7 碳酸鈉
1.8 可溶性淀粉
1.9 水浴鍋
1.10 碘量瓶
2. 試劑的制備
2.1 pH3.5的酸水
用醋酸將蒸餾水調(diào)至3.5
2.2 1%果膠溶液：
準(zhǔn)確稱取分析純果膠1g，用酸水溶解煮沸，冷卻后過濾，定至100ml。
2.2 0.1N碘液：
準(zhǔn)確稱取碘化鉀5g，用蒸餾水溶解后，加入2.54g碘，溶解后定容至100ml。
2.3 0.025mol/L硫代硫酸鈉：
準(zhǔn)確稱取6.2g硫代硫酸鈉，加蒸餾水后定容至1L
2.4 0.5%可溶性淀粉指示劑：
準(zhǔn)確稱取可溶性淀粉0.5g放入沸水中消煮至透明。
2.5 1M碳酸鈉溶液：
準(zhǔn)確稱取10.6g碳酸鈉，定容于100ml的水中
2.6 2N硫酸：
吸10ml的濃硫酸倒入170ml的水中
2.7 酶樣的制備
準(zhǔn)確稱取1.000g固體酶或移取1ml液體酶樣，定容至100ml，于50℃水浴浸取1小時(shí)，過濾，濾液為供試酶液。則該酶已經(jīng)稀釋100倍。
3. 程序
3.1 取1%果膠酶10ml加入5ml酶液和5ml蒸餾水（PH3.5），在50℃水浴中保溫反應(yīng)1小時(shí)。
3.2 取出后加熱煮沸2~3min，冷卻后，補(bǔ)水至20ml。
3.3 取5ml反應(yīng)液于100ml碘量瓶中，加1M碳酸鈉溶液1ml,0.1N碘液5ml，搖勻，具塞，于室溫暗處下放置20min。
3.4 取出后加2N硫酸2ml，立即用0.05N硫代硫酸鈉溶液滴定至淺黃色，加1ml0.5%可溶性淀粉溶液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失為止。
3.5 空白試驗(yàn)以煮沸失活的酶液或蒸餾水代替酶液進(jìn)行滴定。
3.6 每個(gè)酶樣最少做兩個(gè)平行樣。
4. 計(jì)算
4.1 將測(cè)得的各平行樣求OD值的均值。
4.2 計(jì)算酶的活性單位依據(jù)以下公式
酶的活力= [（B-A）*N*0.5*175*20*n*1000]/[51*52*W*60 ]
單位： U/g(ml)
式中： A：樣品滴定所消耗硫代硫酸鈉的毫升數(shù)。
B：空白滴定所消耗硫代硫酸鈉的毫升數(shù)。
N：硫代硫酸鈉摩爾濃度。
0.5:1當(dāng)量硫代硫酸鈉相當(dāng)于0.5當(dāng)量半乳糖醛酸。
20：反應(yīng)液總體積
51：酶液體積以1ml計(jì)
52：吸取反應(yīng)液
n：稀釋倍數(shù)
W：酶粉重量g或酶液體積ml
6.果膠酶的檢測(cè)方法
果膠酶活性的檢測(cè) [目的] 本檢測(cè)方法是用來果膠酶的催化活性。
本方法適用于各種固體和液體果膠酶制劑。 [說明] 本方法適合于果膠酶的質(zhì)量分析和質(zhì)量控制領(lǐng)域。
但不是本公司產(chǎn)品及其它公司產(chǎn)品的絕對(duì)活力的預(yù)測(cè)，而各種酶制劑的最終的酶活力在良好的實(shí)驗(yàn)操作下仍可發(fā)揮出更好的催化活力。 [原理] 果膠物質(zhì)主要存在于植物初生壁和細(xì)胞中間，果膠物質(zhì)是細(xì)胞壁的基質(zhì)多糖。
果膠包括兩種酸性多糖（聚半乳糖醛酸、聚鼠李半乳糖醛酸）和三種中性多糖（阿拉伯聚糖、半乳聚糖、阿拉伯半乳聚糖）。果膠酶本質(zhì)上是聚半乳糖醛酸水解酶，果膠酶水解果膠主要生成β-半乳糖醛酸，可用次碘酸鈉法進(jìn)行半乳醛酸的定量，從而測(cè)定果膠酶活力。
[果膠酶活力單位定義] 1g（或1ml液體酶）酶粉，于50.0℃、pH3.5條件下，每分鐘催化果膠水解生成1微克半乳糖醛酸的酶量為一個(gè)活力單位。 1. 試劑和儀器 *本標(biāo)準(zhǔn)所使用所有的試劑若無任何說明，均為分析純 1.1 醋酸 1.2 碘 1.3 碘花鉀 1.4 濃硫酸 1.5 果膠（sigma公司） 1.6 硫代硫酸鈉 1.7 碳酸鈉 1.8 可溶性淀粉 1.9 水浴鍋 1.10 碘量瓶 2. 試劑的制備 2.1 pH3.5的酸水 用醋酸將蒸餾水調(diào)至3.5 2.2 1%果膠溶液： 準(zhǔn)確稱取分析純果膠1g，用酸水溶解煮沸，冷卻后過濾，定至100ml。
2.2 0.1N碘液： 準(zhǔn)確稱取碘化鉀5g，用蒸餾水溶解后，加入2.54g碘，溶解后定容至100ml。 2.3 0.025mol/L硫代硫酸鈉： 準(zhǔn)確稱取6.2g硫代硫酸鈉，加蒸餾水后定容至1L 2.4 0.5%可溶性淀粉指示劑： 準(zhǔn)確稱取可溶性淀粉0.5g放入沸水中消煮至透明。
2.5 1M碳酸鈉溶液： 準(zhǔn)確稱取10.6g碳酸鈉，定容于100ml的水中 2.6 2N硫酸： 吸10ml的濃硫酸倒入170ml的水中 2.7 酶樣的制備 準(zhǔn)確稱取1.000g固體酶或移取1ml液體酶樣，定容至100ml，于50℃水浴浸取1小時(shí)，過濾，濾液為供試酶液。則該酶已經(jīng)稀釋100倍。
3. 程序 3.1 取1%果膠酶10ml加入5ml酶液和5ml蒸餾水（PH3.5），在50℃水浴中保溫反應(yīng)1小時(shí)。 3.2 取出后加熱煮沸2~3min，冷卻后，補(bǔ)水至20ml。
3.3 取5ml反應(yīng)液于100ml碘量瓶中，加1M碳酸鈉溶液1ml,0.1N碘液5ml，搖勻，具塞，于室溫暗處下放置20min。 3.4 取出后加2N硫酸2ml，立即用0.05N硫代硫酸鈉溶液滴定至淺黃色，加1ml0.5%可溶性淀粉溶液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失為止。
3.5 空白試驗(yàn)以煮沸失活的酶液或蒸餾水代替酶液進(jìn)行滴定。 3.6 每個(gè)酶樣最少做兩個(gè)平行樣。
4. 計(jì)算 4.1 將測(cè)得的各平行樣求OD值的均值。 4.2 計(jì)算酶的活性單位依據(jù)以下公式 酶的活力= [（B-A）*N*0.5*175*20*n*1000]/[51*52*W*60 ] 單位： U/g(ml) 式中： A：樣品滴定所消耗硫代硫酸鈉的毫升數(shù)。
B：空白滴定所消耗硫代硫酸鈉的毫升數(shù)。 N：硫代硫酸鈉摩爾濃度。
0.5:1當(dāng)量硫代硫酸鈉相當(dāng)于0.5當(dāng)量半乳糖醛酸。 20：反應(yīng)液總體積 51：酶液體積以1ml計(jì) 52：吸取反應(yīng)液 n：稀釋倍數(shù) W：酶粉重量g或酶液體積ml。
7.果膠酶活力測(cè)定的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法是什么
4.2 果膠酶活力測(cè)定 4.2.1 原理 果膠酶水解果膠，生成半乳糖醛酸。
半乳糖醛酸具有還原性糖醛基，可用次亞碘酸法定量測(cè)定，以此來表示果膠酶的活性。 4.2.2 試劑和溶液 a.果膠粉（Sigma公司出品） 10g/L水溶液 稱取果膠粉1.0000g，精確至0.0002g，加水溶解，煮沸，冷卻。
如有不溶物則需進(jìn)行過濾。pH至3.5，用水定容至100ml，在冰箱中貯存?zhèn)溆谩?/p>
使用時(shí)間不超過三天； b.硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液c(Na2S2O3)=0.05mol/L 按GB 601配制與標(biāo)定 0.1mol/L溶液。使用時(shí)準(zhǔn)確稀釋一倍； c.碳酸鈉溶液c(1/2Na2CO3)=1mol/L 按GB 601配制； d.碘標(biāo)準(zhǔn)溶液c(1/2I2)=0.1mol/L 按GB 601配制與標(biāo)定，貯存于棕色瓶中； e.硫酸溶液c(1/2H2SO4)=2mol/L 取濃硫酸（d=1.84）5.6ml，緩慢加入適量水中，冷卻后用水定容至100ml，搖勻； f.可溶性淀粉指示液（10g/L） 按GB 603配制； g.0.1mol/L檸檬酸—檸檬酸鈉緩沖液（pH=3.5） 甲液 稱取檸檬酸（C6H8O7·H2O）21.01g，用水溶解并定容至1000mL； 乙液 稱取檸檬酸三鈉（C6H5Na3O7·2H2O）29.41g，用水溶解并定容至1000ml； 取甲液140ml、乙液60ml，混勻，緩沖液的pH應(yīng)為3.5（用pH計(jì)調(diào)試）。
4.2.3 儀器 a.比色管 25ml; b.恒溫水浴 50±0.2℃； c.容量瓶 25ml、50ml、100ml、200ml、250ml; d.碘量瓶 250ml; e.吸管 1ml、5ml; f.滴定管 25ml。 4.2.4 試驗(yàn)程序 4.2.4.1 制備酶液 a.固體酶 用已知重量的50ml小燒杯，稱取樣品1.0000g，精確至0.0002g，以少量檸檬酸—檸檬酸鈉緩沖液（pH=3.5）溶解，并用玻璃棒搗研，將上清液小心傾入適當(dāng)?shù)娜萘科恐校猎偌由倭烤彌_液，反復(fù)搗研3~4次，最后全部移入容量瓶，用緩沖液定容，搖勻，以四層紗布過濾，濾液供測(cè)試用； b.液體酶 準(zhǔn)確吸取濃縮酶液1.00ml于一定體積的容量瓶中，用檸檬酸—檸檬酸鈉緩沖液（pH=3.5）稀釋定容； c.固體酶或濃縮酶液均須按附錄A要求，準(zhǔn)確稀釋至一定倍數(shù)，酶液濃度應(yīng)控制在消耗0.05mol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（A-B）之差在0.5~1.0ml范圍內(nèi)。
必要時(shí)可先做預(yù)備試驗(yàn)。 4.2.4.2 測(cè)定 a.于甲、乙兩支比色管中，分別加入10g/L果膠溶液5ml，在50±0.2℃水浴中預(yù)熱5~10min; b.向甲管（空白）中加檸檬酸—檸檬酸鈉緩沖液（pH=3.5）5ml；乙管（樣品）中 加稀釋酶液1ml、檸檬酸—檸檬酸鈉緩沖液（pH=3.5）4ml，立刻搖勻，計(jì)時(shí)。
在此溫度下準(zhǔn)確反應(yīng)0.5h，立即取出，加熱煮沸5min終止反應(yīng)，冷卻； c.取上述甲、乙管反應(yīng)液各5ml放入碘量瓶中，準(zhǔn)確加入1mol/L碳酸鈉溶液1ml、0.1mol/L碘液5ml，搖勻，于暗處放置20min; d.取出，加入2mol/L硫酸溶液2ml，用0.05mol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淺黃色，加淀粉指示液3滴，繼續(xù)滴定至藍(lán)色剛好消失為其終點(diǎn)，記錄甲管（空白）、乙管（樣品）反應(yīng)液消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積。同時(shí)作平行樣品測(cè)定。
4.2.5 試驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算 1g酶粉或1ml酶液在50℃、pH3.5的條件下，1h分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活單位。 10 X=(A-B)*c*0.51*194.14*n*—————=（A-B）*c*n*396.05 。
.(1) 5*1*0.5 式中X——樣品的酶活力，u/g(u/ml); A——空白消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，ml; B——樣品消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，ml; c——硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L; 0.51——1毫摩爾硫代硫酸鈉相當(dāng)于0.51毫摩爾的游離半乳糖醛酸； 194.14——半乳糖醛酸的毫摩爾質(zhì)量，mg; n——酶液稀釋倍數(shù)； 10——反應(yīng)液總體積，ml; 5——滴定時(shí)取反應(yīng)混合物的體積，ml; 1——反應(yīng)時(shí)加入稀釋酶液的體積，ml; 0.5——反應(yīng)時(shí)間，h。
所得結(jié)果應(yīng)表示至整數(shù)。 注：果膠暫定用Sigma公司產(chǎn)品為標(biāo)準(zhǔn)底物。
若購不到，使用其他廠產(chǎn)品時(shí)， 必須作對(duì)照試驗(yàn)。 4.2.6 結(jié)果的允許差 平行試驗(yàn)，滴定時(shí)消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（毫升）不得超過0.05ml。
8.果膠酶怎么樣定性檢測(cè)
本方法適用于各種固體和液體果膠酶制劑。
[說明]本方法適合于果膠酶的質(zhì)量分析和質(zhì)量控制領(lǐng)域。但不是本公司產(chǎn)品及其它公司產(chǎn)品的絕對(duì)活力的預(yù)測(cè)，而各種酶制劑的最終的酶活力在良好的實(shí)驗(yàn)操作下仍可發(fā)揮出更好的催化活力.05N硫代硫酸鈉溶液滴定至淺黃色，加1ml0.5%可溶性淀粉溶液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失為止。
3.5 空白試驗(yàn)以煮沸失活的酶液或蒸餾水代替酶液進(jìn)行滴定： U/g(ml)式中： A。2:1當(dāng)量硫代硫酸鈉相當(dāng)于0.5當(dāng)量半乳糖醛酸，在50℃水浴中保溫反應(yīng)1小時(shí)。
3.2 取出后加熱煮沸2~3min，冷卻后，補(bǔ)水至20ml。3.3 取5ml反應(yīng)液于100ml碘量瓶中，加1M碳酸鈉溶液1ml,0.1N碘液5ml，搖勻.1N碘液：準(zhǔn)確稱取碘化鉀5g，用蒸餾水溶解后，加入2.54g碘，果膠酶水解果膠主要生成β-半乳糖醛酸，可用次碘酸鈉法進(jìn)行半乳醛酸的定量.5.10 碘量瓶2.5條件下，每分鐘催化果膠水解生成1微克半乳糖醛酸的酶量為一個(gè)活力單位。
1. 試劑和儀器*本標(biāo)準(zhǔn)所使用所有的試劑若無任何說明，均為分析純1。3.5%可溶性淀粉指示劑：準(zhǔn)確稱取可溶性淀粉0.1 取1%果膠酶10ml加入5ml酶液和5ml蒸餾水（PH3.5）。
N.4 濃硫酸1.5 果膠（sigma公司）1。0.2 1%果膠溶液：準(zhǔn)確稱取分析純果膠1g，用酸水溶解煮沸，冷卻后過濾，定至100ml。
2.2 0.5g放入沸水中消煮至透明。2.5 1M碳酸鈉溶液：硫代硫酸鈉摩爾濃度. 試劑的制備2.6 硫代硫酸鈉1.7 碳酸鈉1，過濾，濾液為供試酶液。
則該酶已經(jīng)稀釋100倍。3. 程序3.1 醋酸1.2 碘1.3 碘花鉀1：準(zhǔn)確稱取10.6g碳酸鈉，定容于100ml的水中2。
[原理]果膠物質(zhì)主要存在于植物初生壁和細(xì)胞中間，于50℃水浴浸取1小時(shí)：樣品滴定所消耗硫代硫酸鈉的毫升數(shù)。B：空白滴定所消耗硫代硫酸鈉的毫升數(shù)。
20：反應(yīng)液總體積51.2 計(jì)算酶的活性單位依據(jù)以下公式酶的活力= [（B-A）*N*0.1 pH3，果膠物質(zhì)是細(xì)胞壁的基質(zhì)多糖，具塞，于室溫暗處下放置20min。3.4 取出后加2N硫酸2ml，立即用0。
4、聚鼠李半乳糖醛酸）和三種中性多糖（阿拉伯聚糖、半乳聚糖.6 每個(gè)酶樣最少做兩個(gè)平行樣。4. 計(jì)算 4.1 將測(cè)得的各平行樣求OD值的均值.8 可溶性淀粉1.9 水浴鍋1;L硫代硫酸鈉：準(zhǔn)確稱取6.2g硫代硫酸鈉，加蒸餾水后定容至1L2.4 0。
果膠包括兩種酸性多糖（聚半乳糖醛酸：吸10ml的濃硫酸倒入170ml的水中2.7 酶樣的制備準(zhǔn)確稱取1.000g固體酶或移取1ml液體酶樣，定容至100ml.6 2N硫酸、阿拉伯半乳聚糖）。果膠酶本質(zhì)上是聚半乳糖醛酸水解酶.3 0.025mol/，溶解后定容至100ml。
[果膠酶活力單位定義] 1g（或1ml液體酶）酶粉，于50.0℃.5的酸水用醋酸將蒸餾水調(diào)至3.52，從而測(cè)定果膠酶活力、pH3果膠酶活性的檢測(cè)[目的]本檢測(cè)方法是用來果膠酶的催化活性：酶液體積以1ml計(jì)52.5*175*20*n*1000]/[51*52*W*60 ] 單位 展開。
