離子色譜法使用(離子色譜系統的使用和維護需要的注意事項有哪些)
1.離子色譜系統的使用和維護需要的注意事項有哪些
離子色譜系統的使用和維護注意事項
1. 試劑用水需要到達 18.2M，洗脫液必須經(jīng) 0.45um 或更小的濾膜抽濾（必 要時(shí)可用二層濾膜過(guò)濾）真空脫氣后才可使用。濾膜為一次性，每次使 用前需要先過(guò)濾高純水以清洗干凈。抑制器再生液可以不過(guò)濾脫氣。
2. 環(huán)境必須無(wú)腐蝕氣體，通風(fēng)良好。 樣品一定要去除固體微粒后才能進(jìn)樣。如樣品比較臟可以先用濾紙粗濾 后再過(guò) 0.45um 的濾膜過(guò)濾，一定要得到澄清液后才經(jīng)濾頭進(jìn)樣。對有顏 色的骯臟的樣品要用做前處理后才可進(jìn)樣。
3. 洗脫液試劑需要優(yōu)級純以上。 分析柱不可摔打碰撞。 分析柱上有箭頭表示洗脫液流進(jìn)和流出的方向，不可以接反。 安裝分析柱時(shí)，為避免氣泡產(chǎn)生請按下述順序安裝： 擰開(kāi)分析柱進(jìn)口接 頭螺絲，裝好配制的洗脫液，排氣泡后啟動(dòng) IC 泵，待有溶液從管接頭流 出后，把分析柱進(jìn)口接頭螺絲擰緊，待有溶液從分析柱出口流出時(shí)，不 要急于擰上出口接頭螺絲，讓溶液沖洗分析柱 5 分鐘左右，然后再接上 分析柱出口接頭螺絲。
4. 必須在有保護柱的情況下做樣。 不要把樣品中的氣泡注射入分析柱。 10. 裝標準的容量瓶不可用酸泡。
5. 高壓 IC 泵不可空轉。
6. 每天關(guān)機前要用淋洗脫液沖洗分析柱 30 分鐘。
7. 電腦中的電源管理和屏幕保護要關(guān)閉。
2.請問(wèn)離子色譜儀具體操作步驟有哪些
操作步驟 ：
1、打開(kāi)鋼瓶氣源開(kāi)關(guān)，分壓表調到0.2-0.3（建議不關(guān)閉鋼瓶氣源）；
2、調節減壓閥到3-6Psi左右；
3、依次打開(kāi)SP泵、EG淋洗液自動(dòng)發(fā)生器、DC色譜單元、AS自動(dòng)進(jìn)樣器和VWD紫外檢測器的電源開(kāi)關(guān)。
4、如儀器長(cháng)時(shí)間不使用或更換淋洗液后，要先打開(kāi)平衡泵頭上的PRIME閥排氣。
5、打開(kāi)電腦，待右下角變色龍服務(wù)器圖標變灰色后，雙擊桌面的變色龍，打開(kāi)控制面板。
6、開(kāi)泵，根據連接的柱子設定泵流速（氨基酸0.22；糖PA10 1；糖PA200 0.4；陰離子1或1.2；氫氧化鉀濃度30mM；陽(yáng)離子CS18:0.25）；設定柱箱溫度（30度）；
電導檢測器：根據具體的試驗條件，在控制面板DC頁(yè)面選定抑制器類(lèi)型和電流；在CD頁(yè)面設定并開(kāi)啟檢測器溫度。
電化學(xué)檢測器：在ED頁(yè)面打開(kāi)池子電壓，選擇CVMODE為INTAMP并
選定波形（WAVEFORM）。
7、系統平衡
8、編輯運行樣品表（SEQUENCE）
9、系統平衡好后，停止采集基線(xiàn)，啟動(dòng)樣品表（依次點(diǎn)擊BATCH、START），選擇要運行的樣品表。
10、做完樣后雙擊打開(kāi)第一個(gè)標準，點(diǎn)擊QNT-EDITER，進(jìn)行數據處理。
11、關(guān)機前的工作
陰離子：如果樣品很復雜，先用高濃度氫氧化鈉（50-60mM氫氧化鈉）清洗系統15-20分鐘，然后在調到30mM正常濃度清洗30分鐘；
陽(yáng)離子：用正常淋洗液條件（5mM）沖洗系統20分鐘；
糖PA10：使用200mM氫氧化鈉沖洗系統15分鐘，然后再換成18mM清洗15-20分鐘；
氨基酸：最好在結束樣品后走一空白梯度或進(jìn)針水走一75分鐘的梯度；
糖PA200：用100mM氫氧化鈉/50mM醋酸鈉走20分鐘 。
12、關(guān)機
陰陽(yáng)離子：將抑制器電流關(guān)掉，然后將泵逐步降為0； 氨基酸、糖：將電化學(xué)檢測池電壓關(guān)掉，然后將泵逐步降為0。 接著(zhù)，斷開(kāi)AS、DC、EG、DP、VWD的連接。關(guān)閉各設備的電源。建議不要關(guān)掉氮氣。
3.以離子交換色譜法為例,簡(jiǎn)述濕法裝柱的操作過(guò)程和注意事項
1.樣品處理：對被分離樣品有時(shí)要經(jīng)過(guò)水解等化學(xué)處理，樣品溶液一般要兼顧到濃度與粘度兩方面。
+ B4 ^: J i3 _) \- T: R/ |" v2.離子交換柱的安裝：層析柱內徑必須粗細均勻，柱管大小可據實(shí)際需要選擇。柱下端膠塞中插入一放液管，膠塞上蓋以園形尼龍綢或發(fā)泡塑料片以防止交換樹(shù)脂流出。
+ H/ ?0 X, d' E2 P8 h& S- U3.裝柱：⑴裝柱質(zhì)量是確保柱層析分離效果的技術(shù)關(guān)鍵之一，越是高技術(shù)層析（如使用毛細管層析柱的高級層析設備）裝柱的技術(shù)要求和難度越高，以至手工操作很難達到。⑵裝柱的質(zhì)量要求，無(wú)論是手工、機械、自動(dòng)化裝柱都是一樣的，要求裝入柱中的分離載體材料松緊適度，分布均勻，無(wú)氣泡、無(wú)斷層、無(wú)結節，能保持正常的溶脹形態(tài)和結構；⑶裝入柱中樹(shù)脂的高度與直徑之比因分離對象和分離目的不同而相差很大，本教材推薦的肝素鈉洗脫柱裝柱高度是柱徑的4~6倍。
⑷操作次序，以手工裝入溶脹的D254樹(shù)脂（濕法裝柱）為例，其操作程序可概括為：①查連接（柱與塞之間、上下塞與進(jìn)出液管之間、梯度混合器與進(jìn)液管之間、出液管與收集器之間等等的連接是否正確、緊密），②試止漏（塞子、接頭、活塞開(kāi)關(guān)處在長(cháng)時(shí)間滿(mǎn)負荷下不泄漏），③加隔離緩沖墊（緊貼于柱子下端塞子的內平面），④加少許平衡液于空柱內，⑤趕氣泡（緩沖墊內和出水管中的氣泡），⑥開(kāi)通放水開(kāi)關(guān)，⑦與放水量保持相當的流速，向柱內勻速加完載體材料漿，⑧關(guān)閉放水開(kāi)關(guān)，令樹(shù)脂自然下沉，⑨用洗滌液和清水洗滌樹(shù)脂，⑩最后用緩沖液過(guò)柱和平衡柱，使樹(shù)脂結構平衡穩定，⑾在樹(shù)脂表面蓋上一片尼龍或泡膜塑料，并與柱子內壁保持嚴密接觸，以防加樣時(shí)樹(shù)脂泛起。 （ ？6 Y, g6 D5 S2 e- z% v b* m4.加樣：緩緩打開(kāi)柱子下端的放液開(kāi)關(guān)，使柱內液面剛好降至樹(shù)脂面時(shí)便立即將樣品溶液小心地加到尼龍或泡膜塑料片上，待樣品液面剛好進(jìn)入樹(shù)脂層內便立即加入少許平衡緩沖液，以清洗粘附在覆蓋層中的樣品，并隨之進(jìn)入樹(shù)脂層。
當柱內液位接近樹(shù)脂表面時(shí)便立即添加洗滌液進(jìn)行洗滌操作。$ o+ c9 M: n3 `% Q 5.洗滌：選用合適的洗滌液、恰當的總用量及洗滌流速，小心洗滌柱內樹(shù)脂，以除去不被離交樹(shù)脂吸附的雜質(zhì)。
： K0 s* j/ p; W4 d） o7 W6 _ 6.洗脫：由洗脫曲線(xiàn)找出洗脫液的最佳濃度和適當的總量、操作壓及流速進(jìn)行洗脫。 5 m- U F# X! m' M. O# g! |7.監測：用敏感快速的方法（參見(jiàn)下文“測定”）監測分離成分是否洗脫出來(lái)以及洗脫峰的軸向分布 9 v2 C$ h- _- \: S8.收集：一旦發(fā)現待分離成分洗脫出來(lái)便可進(jìn)行一步或分步收集，并可根據各成分洗脫峰的軸向分布和濃度監測，決定產(chǎn)品收集濃度區段，棄去的洗脫液可循環(huán)用于相同成分的洗脫。
1 v7 I2 v8 H, m8 y3 ] M; J8 m9.沉淀/離心：用沉淀劑可將分離組分沉淀或離心下來(lái)脫水干燥，沉淀劑回收再用。 " a3 @7 z0 a' t10.脫水干燥：加入適當脫水劑為如無(wú)水乙醇、丙酮或乙醚脫水后進(jìn)一步干燥。
5 _" H" J" X0 e% v" V 11.測定：對層析所得產(chǎn)品可稱(chēng)重或測定活性計算其得量和收率。. ^7 ]4 x, e- `1 p# y- z. d7 g9 m5 ` 【注意事項】4 G; U! }* `$ X7 C" b: b0 f 1.應根據被分離物質(zhì)的理化性質(zhì)、分子大小、分子形狀和分離的目的要求，選擇分離效果好、交換容量大而機械強度較高的分離載體材料。
市售的分離載體有明確的規格型號、理化性質(zhì)、功能作用、活化再生和保養存放等技術(shù)參數資料可供用戶(hù)選擇。 * K7 Q, U. T% x8 y5 R2.應根據分離純化的對象、規模選擇層析柱的長(cháng)短、粗細、柱高與內徑之比，使達到最佳分離效果；此外，柱子材料的化學(xué)性質(zhì)要穩定、透明，內徑要均一、光滑，死腔要愈小愈好，要有利于緊固、連接、裝柱與維護。
4 E& F! k7 Q. W3 [& s/ k( ?- P3.柱子安放要垂直、穩固，與之相連的各種線(xiàn)路、管道、設備、設施的布局和連接要緊奏，要方便操作、觀(guān)察與維護。4 F5 w( v8 w+ c4 C 4.要求裝入柱中的分離載體材料松緊適度，分布均勻，無(wú)氣泡、無(wú)斷層、無(wú)結節，能保持正常的溶脹形態(tài)和結構。
5 F n1 O% }8 d z+ T0 L# t2 |3 C 5.保持柱內樹(shù)脂層面平整、層序結構始終如一是確保柱層析分離效果的又一技術(shù)關(guān)鍵。為此，從裝柱到洗脫結束的過(guò)程中，尤其是加樣、洗滌、洗脫過(guò)程中要始終保持柱內液位不低于柱內樹(shù)脂的頂部平面，尤其要始終保持柱內樹(shù)脂的層序結構始終如一，不被打亂，特別要防止更換濃度不同的洗滌洗脫液時(shí)發(fā)生“翻缸”而攪亂樹(shù)脂層結構，“壓缸”而造成柱層斷裂和梗塞斷流。
7 z/ W" C+ E8 q: i& t g6.注意保持一定的操作壓，這對確保層析柱流速和分離效果十分重要。因為流速不僅與洗脫液加在柱上的壓力（因液面差造成）有關(guān)，也與裝柱材料的粒度、交聯(lián)度、機械強度有關(guān)。
應針對具體情況建立一個(gè)操作壓、流速和分離效果的最佳平衡點(diǎn)。 ； N( j K7 n0 T" {9 [$ S6.顯著(zhù)標明各種洗滌、洗脫液的技術(shù)參數，嚴禁亂用和混用。
) M) k" o* {2 g( F 7.制作洗脫曲線(xiàn)，確定洗脫液收集方案，設置洗脫監控點(diǎn)。2 N; I* F% \6 e9 I5 J% X1 V 8.注意剔除破損樹(shù)脂，及時(shí)補足流失、破損的循環(huán)樹(shù)脂量。
# S5 F F8 K3 V2 ]9 A1 E6 U+ o9.嚴格掌握新、舊樹(shù)脂的活化、再生條件，及時(shí)再生舊樹(shù)脂。
4.離子色譜常見(jiàn)問(wèn)題有哪些
1、電導檢測器常見(jiàn)故障
電導檢測器常見(jiàn)故障是檢測池被污染。
故障原因：污染物主要來(lái)源于沒(méi)有經(jīng)過(guò)適當前處理的樣品，如濃度過(guò)高、復雜的樣品基體等。
故障現象：基線(xiàn)噪聲變大，靈敏度降低。
2、分析泵常見(jiàn)故障
分析泵常見(jiàn)故障是泵內產(chǎn)生氣泡和漏液
故障現象：基線(xiàn)的噪聲加大，色譜峰形變差（出現亂峰）。
3、抑制器使用中的常見(jiàn)故障與排除
抑制器在離子色譜儀中具有舉足輕重的作用。抑制器工作性能的好壞對分析結果有很大的影響。抑制器最常見(jiàn)的故障是漏液，使峰面積減小（靈敏度下降）和背景電導升高。
(1)峰面積減小
造成峰面積減小的主要原因有：微膜脫水、抑制器漏液、溶液流路不暢和微膜被玷污。抑制器長(cháng)期不用，會(huì )發(fā)生微膜脫水現象，為激活抑制器，可用注射器向陰離子抑制器內以淋洗液流路相反的方向注入少許0.2mol/L的硫酸溶液。同時(shí)向再生液進(jìn)口注入少許純凈水，并將抑制器放置半小時(shí)以上。抑制器內玷污的金屬離子可以用草酸鈉清洗。
(2)背景電導值高
在化學(xué)抑制型電導檢測分析過(guò)程中，若背景電導高，說(shuō)明抑制器部分存在一定的問(wèn)題。大多數是操作不當引起的。例如淋洗液或再生液流路堵塞，系統中無(wú)溶液流動(dòng)造成背景電導偏高或使用的電抑制器電流設置的太小等。膜被污染后交換容量下降亦會(huì )使背景電導升高。而失效的抑制器在使用時(shí)會(huì )出現背景電導持續升高的現象，此時(shí)應更換一支新的抑制器。
(3)漏液
抑制器漏液的主要原因是抑制器內的微膜沒(méi)有充分水化。
因此，長(cháng)時(shí)間未使用的抑制器在使用前應讓微膜水溶脹后再使用。另外要保證再生液出口順暢，因此反壓較大時(shí)也會(huì )造成抑制器漏液。另外抑制器保管不當造成抑制器內的微膜收縮、破裂也會(huì )發(fā)生漏液現象。
