儀器有分光光度計 臺式離心機 精密天平 三角瓶 燒杯 量筒 移液器 Folin—酚試劑法最早由Lowry確定了蛋白質(zhì)濃度測定的基本步驟。
以后在生物化學(xué)領(lǐng)域得到廣泛的應用。這種蛋白質(zhì)測定法是最靈敏的方法之一。
過(guò)去此法是應用最廣泛的一種方法,由于其試劑乙的配制較為困難(現在已可以訂購),近年來(lái)逐漸被考馬斯亮蘭法所取代。此法的顯色原理與雙縮脲法是相同的,只是加入了第二種試劑,即Folin—酚試劑,以增加顯色量,從而提高了檢測蛋白質(zhì)的靈敏度。
這兩種顯色反應產(chǎn)生深藍色的原因是:在堿性條件下,蛋白質(zhì)中的肽鍵與銅結合生成復合物。 Folin—酚試劑中的磷鉬酸鹽—磷鎢酸鹽被蛋白質(zhì)中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原,產(chǎn)生深藍色(鉬蘭和鎢蘭的混合物)。
在一定的條件下,藍色深度與蛋白的量成正比。
Folin-酚法蛋白定量包括兩步反應:第一步生成蛋白質(zhì)一銅絡(luò )合物; 第二步是酚基將磷鑰酸、磷鎢酸試劑還原. 試劑甲由A(4%碳酸鈉溶液與0.2mol/L氫氧化鈉溶液等體積混合)和B(1%硫酸銅溶液與2%的酒石酸鉀鈉溶液等體積混合)
兩種溶液組成.你說(shuō)的加了甲后10min再加乙,因為第一步反應肯定要時(shí)間的,
試劑甲當然不能省了,其他的不說(shuō),它最起碼提供了堿性的反應條件,
Folin-酚法測定蛋白酶活力的原理是蛋白酶水解酪蛋白產(chǎn)生Tyr, 在堿性條件下,Tyr與Folin試劑反應生產(chǎn)藍色物質(zhì),于680nm比色測定光吸收值,計算酶活力。要繪制 Tyr標準曲線(xiàn),
這兩個(gè)共同的步驟是第二步顯色反應.
聲明:本網(wǎng)站尊重并保護知識產(chǎn)權,根據《信息網(wǎng)絡(luò )傳播權保護條例》,如果我們轉載的作品侵犯了您的權利,請在一個(gè)月內通知我們,我們會(huì )及時(shí)刪除。
蜀ICP備2020033479號-4 Copyright ? 2016 學(xué)習?shū)B(niǎo). 頁(yè)面生成時(shí)間:3.599秒