酶一般性質(zhì)的測定(酶活力測定的注意事項有哪些)
1.酶活力測定的注意事項有哪些
測定酶活力時，必須注意以下幾點：
1、酶促反應過程中，只有最初一段時間內(nèi)反應速度與酶濃度成正比，隨著反應時間的延長，反應速度即逐漸降低。
2、要規(guī)定一定的反應條件，如時間、溫度、pH等，并在酶測定過程中保持這些反應條件的恒定，如溫度不得超過規(guī)定溫度的士1℃，pH應恒定。
3、配制的底物濃度應準確且足夠大，底物液中應加入不抑制該酶活力的防腐劑并保存于冰箱中，以防止底物被分解。
4、標本要新鮮，由于絕大多數(shù)酶可因久置而活力降低，標本如無法及時測定，應保存于冰箱中。用血漿時，應考慮到抗凝劑對酶反應的影響。有些酶在血細胞、血小板中的濃度比血清高，為此在采血、分離血清時，應注意防止溶血和白細胞的破裂。
5、在測定過程中，所用儀器應絕對清潔，不應含有酶的抑制物，如酸、堿、蛋白沉淀劑等。
擴展資料：
酶活力
1、單位：在特定條件下，1分鐘內(nèi)轉(zhuǎn)化1微摩爾底物所需的酶量為一個活力單位（U）。溫度規(guī)定為25度，其他條件取反應的最適條件。
2、比活力：每毫克酶蛋白所具有的酶活力。單位是u/mg。比活力越高則酶越純。
3、轉(zhuǎn)化數(shù)：每分子酶或每個酶活性中心在單位時間內(nèi)能催化的底物分子數(shù)（TN）。相當于酶反應的速度常數(shù)kp。也稱為催化常數(shù)（Kcat）。1/kp稱為催化周期。碳酸酐酶是已知轉(zhuǎn)換數(shù)最高的酶之一，高達36*106每分，催化周期為1.7微秒。
參考資料來源：百度百科——酶活力
參考資料來源：百度百科——酶活性測定
2.酶活力測定的注意事項有哪些
1.底物濃度 除選擇適合的底物外，在實際應用中更多考慮的是底物濃度。由于[S]與反應速度V成雙曲線關系，在酶活性測定時，要求[S]達到一定水平以保證酶活性與酶量成正比。[S]范圍一般選擇在10~20Km為宜，此時反應速度基本達到最大反應速度，測定的誤差在可接受范圍。
2.酶濃度 在反應條件一定時，酶濃度與反應速度成正比。按照中間產(chǎn)物學說，只有[S]>>[E]時，酶才能被底物分子飽和，反應速度才能達到最大值。因此當標本酶活力過高時，應將標本適當稀釋后再加以測定。
3.溫度 不同的酶最適溫度可以不同，多數(shù)酶的最適溫度在37~40℃，高于或低于最適溫度，酶活性都降低。目前，酶活性的測定溫度尚未統(tǒng)一，但常規(guī)實驗室多使用37℃。溫度對酶促反應的影響程度通常用溫度系數(shù)（Q10）表示。溫度系數(shù)指溫度每升高10℃，化學反應速度增加的倍數(shù)。Q10通常為l~2。由溫度系數(shù)得知，溫度的變化對酶活性有著重要影響，因此要求酶活性測定要在恒溫條件下進行，溫度波動要控制在±1℃。
4.離子強度和pH值 在最適pH時，酶的活性最強，高于或低于最適pH，酶的活性都降低，多數(shù)酶的最適pH在5~8之間。在測定酶活性時，要求緩沖液具有足夠的緩沖容量，以便使pH值保持穩(wěn)定。血漿或血清標本含有多種緩沖溶質(zhì)，具有較強的緩沖能力。為了防止血漿或血清標本緩沖溶質(zhì)對反應液酸堿度的影響，使pH不致偏離設定值，標本用量不宜過大，血漿或血清標本體積/反應液體積≤1/10為宜。
5 輔助因子 某些金屬離子和維生素類輔酶是結(jié)合酶的輔助因子，例如Zn2+是羧基肽酶的輔基，Mo6+是黃嘌呤氧化酶的輔基，NADH是不需氧脫氫酶的輔酶。這些酶離開它們的輔基或輔酶就不能表現(xiàn)活性，因此在酶活性測定時，就要保證輔基或輔酶的供給。
6.激活劑 有些酶在有激活劑存在時才有活性或活性較高，例如Mg2+是肌酸激酶的激活劑，Cl-是淀粉酶的激活劑。因此在酶活性測定時，也要滿足酶對激活劑的需要。
7.抑制劑 酶的抑制可分為不可逆抑制和可逆抑制，后者又可分為競爭性抑制和非競爭性抑制。重金屬離子和砷化物對巰基酶的抑制、有機磷對羥基酶的抑制屬于不可逆抑制；丙二酸對琥珀酸脫氫酶的抑制、磺胺類藥物對二氫葉酸合成酶的抑制屬于競爭性抑制；哇巴因?qū)a+,K+-ATP酶的抑制屬于非競爭性抑制。抑制劑使酶活性降低，在測定酶活性時，應避免抑制劑的影響。
綜上所述，測定酶活性時，最適條件的選擇應該遵循最適底物濃度、最適溫度、最適pH值、滿足輔助因子和激活劑、避免抑制劑的原則。
3.測定酶活性時應注意些什么?
酶的活性測定要求有適宜的特定反應條件，應注意影響酶促反應速度的各種因素應該相對恒定。
1.酶的樣品應做適當?shù)奶幚怼?.反應體系中，底物的量足夠使酶被底物飽和，以充分反映待測酶的活力。
但過高的底物濃度可能抑制酶的活性，一般底物濃度在10km以上。3.測定代謝物時應保持酶的足夠濃度。
4.應根據(jù)反應時間選擇反應的最適溫度。5.根據(jù)不同的底物和緩沖液選擇反應的最適pH。
6.為獲取最高反應速度，在反應體系中應含有適宜的輔助因子，激活劑等。7.測定酶活性時應測定酶促反應的初速度。
4.進行酶活力測定時應注意什么
測定酶活力時，必須注意以下幾點： （1）酶促反應過程中，只有最初一段時間內(nèi)反應速度與酶濃度成正比，隨著反應時間的延長，反應速度即逐漸降低。
（2）要規(guī)定一定的反應條件，如時間、溫度、pH等，并在酶測定過程中保持這些反應條件的恒定，如溫度不得超過規(guī)定溫度的士1℃，pH應恒定。 （3）配制的底物濃度應準確且足夠大，底物液中應加入不抑制該酶活力的防腐劑并保存于冰箱中，以防止底物被分解。
（4）標本要新鮮，由于絕大多數(shù)酶可因久置而活力降低，標本如無法及時測定，應保存于冰箱中。用血漿時，應考慮到抗凝劑對酶反應的影響。
有些酶在血細胞、血小板中的濃度比血清高，為此在采血、分離血清時，應注意防止溶血和白細胞的破裂。 （5）在測定過程中，所用儀器應絕對清潔，不應含有酶的抑制物，如酸、堿、蛋白沉淀劑等。
5.測定酶活力需要控制哪些條件
最適測定條件與條件的優(yōu)化
國際臨床化學聯(lián)合會（IFCC）和中華醫(yī)學會檢驗分會均推薦選擇在“最適條件”下測定酶活性濃度。所謂最適條件是指能滿足酶促反應速度達到最大反應速度所需的條件。包括：①合適的底物和最適底物濃度；②理想的緩沖液種類和最適離子強度；③反應液的最適pH；④最適反應溫度；⑤合適的輔因子、激活劑濃度；⑥若是酶偶聯(lián)反應，還需要確定指示酶和輔助酶的用量；⑦合理的測定時間，包括延滯期盡量短暫，有足夠的線性期；⑧合適的樣品與反應試劑的比例；⑨足夠的檢測范圍；⑩盡量去除各種抑制劑等。
1.底物濃度
除選擇適合的底物外，在實際應用中更多考慮的是底物濃度。由于[S]與反應速度V成雙曲線關系，在酶活性測定時，要求[S]達到一定水平以保證酶活性與酶量成正比。[S]范圍一般選擇在10~20Km為宜，此時反應速度基本達到最大反應速度，測定的誤差在可接受范圍。
2.酶濃度
在反應條件一定時，酶濃度與反應速度成正比。按照中間產(chǎn)物學說，只有[S]>>[E]時，酶才能被底物分子飽和，反應速度才能達到最大值。因此當標本酶活力過高時，應將標本適當稀釋后再加以測定。
3.溫度
不同的酶最適溫度可以不同，多數(shù)酶的最適溫度在37~40℃，高于或低于最適溫度，酶活性都降低。目前，酶活性的測定溫度尚未統(tǒng)一，但常規(guī)實驗室多使用37℃。溫度對酶促反應的影響程度通常用溫度系數(shù)（Q10）表示。溫度系數(shù)指溫度每升高10℃，化學反應速度增加的倍數(shù)。Q10通常為l~2。由溫度系數(shù)得知，溫度的變化對酶活性有著重要影響，因此要求酶活性測定要在恒溫條件下進行，溫度波動要控制在±1℃。
4.離子強度和pH值
在最適pH時，酶的活性最強，高于或低于最適pH，酶的活性都降低，多數(shù)酶的最適pH在5~8之間。在測定酶活性時，要求緩沖液具有足夠的緩沖容量，以便使pH值保持穩(wěn)定。血漿或血清標本含有多種緩沖溶質(zhì)，具有較強的緩沖能力。為了防止血漿或血清標本緩沖溶質(zhì)對反應液酸堿度的影響，使pH不致偏離設定值，標本用量不宜過大，血漿或血清標本體積/反應液體積≤1/10為宜。
5
輔助因子
某些金屬離子和維生素類輔酶是結(jié)合酶的輔助因子，例如Zn2+是羧基肽酶的輔基，Mo6+是黃嘌呤氧化酶的輔基，NADH是不需氧脫氫酶的輔酶。這些酶離開它們的輔基或輔酶就不能表現(xiàn)活性，因此在酶活性測定時，就要保證輔基或輔酶的供給。
6.激活劑
有些酶在有激活劑存在時才有活性或活性較高，例如Mg2+是肌酸激酶的激活劑，Cl-是淀粉酶的激活劑。因此在酶活性測定時，也要滿足酶對激活劑的需要。
7.抑制劑
酶的抑制可分為不可逆抑制和可逆抑制，后者又可分為競爭性抑制和非競爭性抑制。重金屬離子和砷化物對巰基酶的抑制、有機磷對羥基酶的抑制屬于不可逆抑制；丙二酸對琥珀酸脫氫酶的抑制、磺胺類藥物對二氫葉酸合成酶的抑制屬于競爭性抑制；哇巴因?qū)a+,K+-ATP酶的抑制屬于非競爭性抑制。抑制劑使酶活性降低，在測定酶活性時，應避免抑制劑的影響。
綜上所述，測定酶活性時，最適條件的選擇應該遵循最適底物濃度、最適溫度、最適pH值、滿足輔助因子和激活劑、避免抑制劑的原則。
6.酶有哪些性質(zhì),生物制備對酶特性的要求有哪些
酶的特性
提 問：在化學上同學們也學習過催化劑，那么一般的催化劑都有哪些性質(zhì)呢？
學生回答：用量少而催化效率高，反應前后不發(fā)生變化，促進化學反應迅速進行等。
講 述：酶作為生物催化劑，除了具有上述一般催化劑的性質(zhì)外，還具有以下重要特性：
a.具有高效性：催化反應的速度比一般的無機催化劑高106-107倍，有的酶催化反應速度極快，如碳酸酐酶催化二氧化碳與水合成碳酸的反應是已知最快的酶催化反應之一。每一個酶分子在1秒鐘內(nèi)可以使105個二氧化碳分子發(fā)生水合反應。
b.具有專一性：一種酶只能作用于某一類或某一種特定的物質(zhì)使其發(fā)生反應。如麥芽糖酶只能催化麥芽糖分解成葡萄糖，胃蛋白酶只能催化食物中蛋白質(zhì)的分解。
c.酶的種類具有多樣性：酶的種類繁多，目前已知的約有2千多種。正是由于酶對反應的專一性，成千上萬的化學反應就需要許多的酶分別在各自代謝途徑的特定位置上發(fā)揮作用，保證新陳代謝有條不紊地進行。
歸納總結(jié)：每一種酶都具有高效性和專一性，從酶的家族整體上看呈現(xiàn)出多樣性。
