黃酮類(lèi)化合物還提取方法(黃酮類(lèi)化合物提取分離方法)
1.黃酮類(lèi)化合物提取分離方法有哪些
黃酮類(lèi)化合物（flavonoids）是一類(lèi)存在于自然界的、具有2-苯基色原酮（flavone）結(jié)構(gòu)的化合物。
它們分子中有一個(gè)酮式羰基，第一位上的氧原子具堿性，能與強(qiáng)酸成鹽，其羥基衍生物多具黃色，故又稱(chēng)黃堿素或黃酮。黃酮類(lèi)化合物在植物體中通常與糖結(jié)合成苷類(lèi)，小部分以游離態(tài)（苷元）的形式存在。
絕大多數(shù)植物體內(nèi)都含有黃酮類(lèi)化合物，它在植物的生長(zhǎng)、發(fā)育、開(kāi)花、結(jié)果以及抗菌防病等方面起著重要的作用。 鹽酸-鎂粉還原反應(yīng) 取藥材粉末少許與試管中，用乙醇或甲醇數(shù)毫升溫浸提取，取提取液加鎂粉少許振搖，滴加幾滴濃鹽酸，1-2min內(nèi)即出現(xiàn)顏色。
大多黃酮醇、二氫黃酮及二氫黃酮醇類(lèi)顯紅-紫紅色，黃酮類(lèi)顯橙色，異黃酮及查爾酮類(lèi)無(wú)變化。如蘆丁的鹽酸鎂粉反應(yīng)中溶液由黃色變紅色。
其他還原反應(yīng)還有：鹽酸-鋅粉反應(yīng)，黃酮、黃酮醇類(lèi)常不顯色，只有二氫黃酮醇類(lèi)可被鋅粉還原呈深紅色；鈉-汞齊反應(yīng)，黃酮類(lèi)成分可產(chǎn)生黃、橙、紅等色；四氫硼鈉（鉀）反應(yīng)，僅二氫黃酮醇類(lèi)可被四氫硼鈉還原呈紅色，其他黃酮類(lèi)不反應(yīng)。 金屬鹽類(lèi)試劑絡(luò)合反應(yīng) 黃酮類(lèi)成分和鋁鹽、鎂鹽、鉛鹽、鋯鹽等試劑反應(yīng)，生成有色的絡(luò)合物，可供某些類(lèi)型黃酮的鑒別。
產(chǎn)生絡(luò)合作用的條件是黃酮類(lèi)成分必須具備下列條件之一，如5-羥基、3-羥基或鄰二羥基。根據(jù)有色絡(luò)合物的最大吸收波長(zhǎng)，可進(jìn)行定量測(cè)定。
常用的試劑有三氯化鋁、醋酸鉛、醋酸鎂與二氯氧化鋯等試劑。
2.活性成分總黃酮的提取方法有哪些
總黃酮的提取方法 1、熔劑法 熱水提取法、堿性水或堿性稀醇提取法、有機(jī)溶劑提取法 2、2、微波提取法 微波提取是利用不同結(jié)構(gòu)的物質(zhì)在微波場(chǎng)中吸收微波能力的差異，使基體物質(zhì)中的某些區(qū)域或提取體系中的某些組分被選擇性加熱，從而使被提取物質(zhì)從基體或體系中分離，進(jìn)入介電常數(shù)較小，微波吸收能力相對(duì)差的提取劑[1]。
這種方法的優(yōu)點(diǎn)是對(duì)提取物具有較高的選擇性、提取率高、提取速度快、溶劑用量少、安全、節(jié)能、設(shè)備簡(jiǎn)單[2]。 2.2 超聲波提取法 用超聲波提取法提取黃酮類(lèi)物質(zhì)，是目前比較新的方法。
原理是利用超聲波在液體中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外，還利用其次效應(yīng)，如機(jī)械振動(dòng)、擴(kuò)散、擊碎等，使其加速被提取成分的擴(kuò)散、釋放。超聲波提取法具有設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方便，提取時(shí)間短，產(chǎn)率高，無(wú)需加熱，同時(shí)有利于保護(hù)熱不穩(wěn)定成分，省時(shí)，節(jié)能，提取率高的優(yōu)點(diǎn)。
3、超臨界流體萃取法 超臨界流體萃取技術(shù)是利用超臨界流體處于臨界溫度和臨界壓力以上，兼有氣體和液體的雙重特點(diǎn)，對(duì)物質(zhì)具有良好的溶解能力，從而作溶劑進(jìn)行萃取分離?？勺龀R界流體的物質(zhì)很多，一般為低分子量的化合物，如CO2、C2H6、NH3、N2O 等。
目前多采用CO2 做萃取劑，因?yàn)樗哂忻芏却?、溶解能力?qiáng)、臨界壓力適中、臨界溫度接近常溫、不影響萃取物的生理活性、無(wú)毒無(wú)味、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、生產(chǎn)過(guò)程中容易回收、無(wú)環(huán)境污染、價(jià)格便宜等一系列優(yōu)點(diǎn)。但單一的CO2作萃取劑只對(duì)低極性、親脂性化合物有較強(qiáng)的溶解能力，對(duì)大多數(shù)極性較強(qiáng)的組分則不起作用，因此，在其中加入夾帶劑，通過(guò)影響溶劑的密度和溶質(zhì)與夾帶劑分子間的作用力來(lái)影響溶質(zhì)在二氧化碳流體中的溶解度和選擇性[15]。
超臨界流體萃取技術(shù)有許多傳統(tǒng)分離技術(shù)不可比擬的優(yōu)點(diǎn)：過(guò)程容易控制、達(dá)到平衡的時(shí)間短、萃取效率高、無(wú)有機(jī)溶劑殘留、對(duì)熱敏性物質(zhì)不易破壞等[16]。但它所需要的設(shè)備規(guī)模較大，技術(shù)要求高，投資大，安全操作要求高，難以用于較大 規(guī)模的生產(chǎn)。
4、酶法提取 酶解法適用于被細(xì)胞壁包圍的黃酮類(lèi)物質(zhì)，利用酶反應(yīng)的高度專(zhuān)一性，破壞細(xì)胞壁，使其中的黃酮類(lèi)化合物釋放出來(lái)。黃劍波等[22]采用纖維素酶輔助法從甜茶中提取黃酮類(lèi)化合物，黃酮類(lèi)物質(zhì)的提取率為91%，提取純度為54%。
王悅等[23]對(duì)桔皮細(xì)胞進(jìn)行游離酶、固定化酶和常規(guī)法提取，黃酮得率分別是1.43%,0.94% 和0.79%，和傳統(tǒng)的方法相比，游離酶法的總黃酮得率提高了81%。 5、雙水相提取法 雙水相提取技術(shù)是瑞典Per Albersson首先發(fā)現(xiàn)并研究 的一種技術(shù)，雙水相萃取法屬于液- 液萃取，當(dāng)物質(zhì)進(jìn)入雙 水相體系后，由于表面性質(zhì)、電荷作用和各種力的作用，溶 液環(huán)境的影響，其在上、下相中的濃度不同，即各成分在兩 相間選擇性分配，從而達(dá)到萃取的目的。
由于雙水相體系分 相快、使用溫度低、容易操作、無(wú)污染、提取率高，因此成 為黃酮化合物富集分離的一種有效方法。張春秀等[24]取一 定量的銀杏葉浸提液，加到PEG1500/ 磷酸鹽體系雙水相 系統(tǒng)中，則黃酮類(lèi)化合物進(jìn)入上相PEG，從而將黃酮類(lèi)化合 物分離，提取率可達(dá)98.2%。
6、半仿生提取法 半仿生提取法是將整體藥物研究法與分子藥物研究法相結(jié)合，模擬口服給藥后藥物經(jīng)胃腸道轉(zhuǎn)運(yùn)的環(huán)境，為經(jīng)消化道給藥的中藥制劑設(shè)計(jì)的一種新的提取工藝。這種提取方法的特點(diǎn)是可以提取和保留更多的有效成分，能縮短生產(chǎn)周期、降低成本。
7、膜分離法 膜分離法主要有超濾、微濾、納濾和反滲透等，其中超濾法是膜分離的代表，它是唯一能用于分子分離的過(guò)濾方法，是以多孔性半透膜為分離介質(zhì)，依靠薄膜兩側(cè)壓力差作為推動(dòng)力來(lái)分離溶液中不同分子量的物質(zhì)。由于大多數(shù)黃酮類(lèi)化合物的分子量在1000 以下，而非有效成分如大多數(shù)的多糖、蛋白質(zhì)等分子量多在50000 以上，因而使用超濾能有效去除蛋白質(zhì)、多肽、大分子色素、淀粉等，達(dá)到除菌、除熱原、提高藥液澄明度以及提高有效成分含量等目的。
這種方法操作簡(jiǎn)便、不需要加熱、不損壞黃酮類(lèi)化合物，提取效果好、超濾裝置可反復(fù)使用。于濤等[26]研究了銀杏葉中黃酮類(lèi)化合物的提取過(guò)程及工藝，使用超濾技術(shù)對(duì)粗提的產(chǎn)品進(jìn)行精制，對(duì)影響超濾的工藝條件進(jìn)行了考察，超濾后產(chǎn)品中黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到33.99%。
8、熱壓流體萃取法 熱壓流體萃取法是一種快速、環(huán)保、便宜、有效地萃取生物活性物質(zhì)的方法。Chaorui Chen等[27]采用熱壓流體萃取法從巴西蜂膠中提取了7種黃酮類(lèi)化合物，結(jié)果表明，通過(guò)熱壓水萃取的樣品中當(dāng)存在表面活性劑時(shí)萃取物的固體含量更高，當(dāng)使用熱壓脂溶萃取時(shí)，7種黃酮類(lèi)化合物的含量在脂溶萃取中超過(guò)了水溶萃取。
KairHartonen等[28]用熱壓水萃取法從白楊中萃取了黃酮類(lèi)化合物，考察了萃取時(shí)間、溫度和壓力等因素的影響，并與超聲波萃取、高速逆流色譜做了比較，結(jié)果表明用熱壓水萃取法在150℃萃取35min效 果最好。 2.9 高壓液相提取法 Ying Zhang等[29]通過(guò)高壓液相萃取法從魚(yú)腥草中萃取了黃酮類(lèi)化合物，研究了乙醇濃度、流速、溫度和壓強(qiáng)等因素的影響，并與熱浸法和超聲波輔助萃取法進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)高壓液。
3.什么叫黃酮素,還有,目前國(guó)內(nèi)有提取技術(shù)么,以及,哪些植物可以提
黃酮類(lèi)化合物
flavonoid
以黃酮（2-苯基色原酮）為母核而衍生的一類(lèi)黃色色素。其中包括黃酮的同分異構(gòu)體及其氫化的還原產(chǎn)物 ，也即以C6-C3-C6為基本碳架的一系列化合物。黃酮類(lèi)化合物在植物界分布很廣，在植物體內(nèi)大部分與糖結(jié)合成苷類(lèi)或碳糖基的形式存在，也有以游離形式存在的。天然黃酮類(lèi)化合物母核上常含有羥基、甲氧基、烴氧基、異戊烯氧基等取代基。由于這些助色團(tuán)的存在，使該類(lèi)化合物多顯黃色。又由于分子中γ-吡酮環(huán)上的氧原子能與強(qiáng)酸成
4.柑橘屬中黃酮類(lèi)化合物的提取分離
柑橘屬類(lèi)黃酮多以極性較大的糖苷形式存在，目前廣泛采用極性較大的有機(jī)溶劑進(jìn)行浸提。
對(duì)胡柚皮的提取工藝表明，在乙醇濃度90%，料液比1:5，提取2h，提取溫度40-60℃時(shí)類(lèi)黃酮提取率較高。研究化橘紅用8倍量80%乙醇回流提取3次，1·5 h/次，得到較大的提取率。
研究枳實(shí)藥材中總黃酮提取工藝，得到60%的乙醇，8倍量，回流提取2次，每次1·5 h。近年來(lái)微波、超聲波輔助提取法應(yīng)用于植物細(xì)胞的破壁，有效地提高了有機(jī)物的吸收率，縮短提取時(shí)間，提高效率。
對(duì)于柑橘屬類(lèi)黃酮的分離純化，目前應(yīng)用最廣的為HPLC、柱層析、薄層層析等方法。近年來(lái)采用超臨界CO2萃取也獲得了純度較高的類(lèi)黃酮。
同時(shí)采用樹(shù)脂提取技術(shù)也得到了很好的應(yīng)用，由于樹(shù)脂穩(wěn)定性好、再生簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，也是一種有效的黃酮類(lèi)物質(zhì)分離純化材料，柚皮黃酮經(jīng)大孔樹(shù)脂純化后總黃酮含量達(dá)到39·67%，回收率為62·48%。
5.有誰(shuí)做過(guò)黃酮類(lèi)化合物提取純化試驗(yàn)
黃酮類(lèi)化合物種類(lèi)多，由于其結(jié)構(gòu)和狀態(tài)的不同使得溶解存在著很大的差異。游離的苷元難溶或不溶于水，而易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、****等有機(jī)溶劑或稀堿溶液，其中有些平面型分子，如黃酮、黃酮醇、查耳酮等，分子間排列緊密，引力較大，難溶于水；而非平面型分子，如二氫衍生物，其分子間排列較松弛，引力降低，有利于水分子的進(jìn)入，較易溶于水。
關(guān)于黃酮類(lèi)化合物的提取方法，常用的提取方法：
1、溶劑提取法
黃酮類(lèi)以極性較大的苷元，一般以丙酮、甲醇、乙醇來(lái)提取，而利用黃酮類(lèi)化合物與混入雜質(zhì)的極性不同，選用不同溶劑進(jìn)行萃取則可達(dá)到精制純化的目的。例如，可用石油醚除去一部分脂溶性雜質(zhì)，或加入多倍量濃醇，以沉淀形式去除蛋白質(zhì)、多糖類(lèi)等水溶性化合物。
2、超聲波法
用超聲波提取黃酮類(lèi)物質(zhì)，是近幾年新發(fā)展的方法。它的原理是，超聲空化作用對(duì)細(xì)胞膜的破壞有助于黃酮類(lèi)化合物的釋放與溶出，超聲波使提取液不斷震蕩，有助于溶質(zhì)的擴(kuò)散，同時(shí)由于超聲波的熱效應(yīng)使水溫基本在57度，對(duì)原料有水浴作用。因此，超聲波法不僅大大縮短了提取時(shí)間，而且提高了有效成分的提取率以及原料的利用率。
6.游離黃酮和蒽醌的提取都可以采用什么方法
離。
二 分離方法：
1 蒽醌苷類(lèi)和游離蒽醌衍生物的分離：用分步提取法（如前述） 2 游離蒽醌衍生物的分離：可選用分步結(jié)晶法、梯度pH萃取法或?qū)游龇ㄟM(jìn)行。
梯度pH萃取法是分離游離蒽醌衍生物的經(jīng)典方法：
1.局限性
2.原理 性質(zhì)相似，酸性差別不大的混合物不適用
3 有些蒽酮雖然存在酚羥基，但在稀堿溶液中較相應(yīng)的蒽醌難溶，
如大黃酚蒽酮-9，故蒽醌衍生物的苯提取液用極稀的NaOH液萃取，可除去蒽醌而使蒽酮留在苯液中。 示例
色譜法在蒽醌苷元分離中的應(yīng)用：
一般先用經(jīng)典方法（如梯度pH萃?。?duì)其進(jìn)行初步分離，再結(jié)合柱色譜法或制備性TLC法作進(jìn)一步的分離，多用硅膠吸附色譜，而氧化鋁一般不用，也常用聚酰胺作為柱色譜的填料。
?
三、黃酮類(lèi)化合物的提取與分離
（一）提取
黃酮甙類(lèi)以及極性稍大的甙元（如羥基黃酮等），一般可
用丙酮、醋酸乙酯、乙醇提取。一些多糖甙類(lèi)可用沸水提取。在提取花青素類(lèi)化合物時(shí)，可加入少量酸（0.1%鹽酸，應(yīng)當(dāng)慎用，避免發(fā)生水解）。
劑進(jìn)行提取。對(duì)得到的粗提物可進(jìn)行下列精制處理，常用方法有：
（一）溶劑萃取法 利用黃酮類(lèi)化合物與混入的雜質(zhì)極性不同，選用不同溶劑進(jìn)行地萃取可達(dá)到精制純化目的。例如植物葉子的醇浸液，可用石油醚處理，以便除去葉綠素、胡蘿卜素等脂溶性色素。而某些藥料水溶液則可加入多倍量濃醇，以沉淀除去蛋白質(zhì)、多糖類(lèi)等水溶性雜質(zhì)。
有時(shí)溶劑萃取過(guò)程也可以用逆流分配法連續(xù)進(jìn)行。常用的溶劑系統(tǒng)有：水-醋酸乙酯，正丁醇-石油醚等。
溶劑萃取過(guò)程在除去雜質(zhì)的同時(shí)，往往還可以收到分離甙和甙元或極性甙元與非極性甙元的效果。
（二）堿提取酸沉淀法 黃酮甙類(lèi)雖有一定極性，可溶于水，但卻難溶于酸性水，易溶于堿性水，故可用堿性水提取，再于堿水提取液中加入酸，黃酮甙類(lèi)即可沉淀析出。此法簡(jiǎn)便易行，如蘆丁、橙皮甙、黃芩甙的提取都應(yīng)用了這個(gè)方法。
茲以從槐米中提取蘆丁為例說(shuō)明該法的操作過(guò)程。 槐米（槐樹(shù)Sophora japonica L. 花蕾）加約6倍量水，煮沸，在攪拌
下緩緩加入石灰乳至pH8~9，在此pH條件下微沸20~30分鐘，趁熱油濾，殘?jiān)显偌?倍水煎1次，乘熱抽濾。合并濾液在60~70℃下，用濃鹽酸調(diào)至pH為5，攪勻，靜置24小時(shí)，抽濾。沉淀物水洗至中性，60℃干燥得蘆丁粗品，于水中重結(jié)晶，70~80℃干燥得
蘆丁純品。
在用堿酸法進(jìn)行提取純化時(shí)，應(yīng)當(dāng)注意所用堿液濃度不宜過(guò)高，以免在強(qiáng)堿性下，尤其加熱進(jìn)破壞黃酮母核。在加酸酸化時(shí)，酸性也不宜過(guò)強(qiáng)，以免生成（金羊）鹽，致使析出的黃酮類(lèi)化合物又重新溶解，降低產(chǎn)品收率。
當(dāng)藥料中含有大量果膠、粘液等不溶性雜質(zhì)時(shí)，如花、果類(lèi)藥
材，宜用石灰乳或石灰水代替其它堿性水溶液進(jìn)行提取，以使上述含羥基的雜質(zhì)生成鈣鹽沉淀，不致溶出。這也有利于黃酮類(lèi)化合物的純化處理。
（三）碳粉吸附法 主要適于甙類(lèi)的精制工作。通常，在
植物的甲醇粗提取物中，分次加入活性炭，攪拌，靜置，直至定性檢查上清液無(wú)黃酮反應(yīng)時(shí)為止。過(guò)濾，收集吸甙炭末，依次用沸甲醇、沸水、7%酚/水、15%酚/醇溶液進(jìn)行洗脫，各部分洗脫液進(jìn)行定性檢查（或用PPC鑒定）。通過(guò)對(duì)Baptisia lecontei 中黃酮類(lèi)化合物的研究證明，大部分黃酮甙類(lèi)可用7%酚/水洗下。洗脫液經(jīng)減壓蒸發(fā)濃縮至小體積，再用乙醚振搖除去殘留的酚，余下水層減壓濃縮即得較純的黃酮甙類(lèi)成分。
