細(xì)胞器的分離主要用到的是離心技術(shù)。
主要用到:(一)、差速離心(differential centrifugation)在密度均一的介質(zhì)中由低速到高速逐級(jí)離心,用于分離不同大小的細(xì)胞和細(xì)胞器。在差速離心中細(xì)胞器沉降的順序依次為:核、線粒體、溶酶體與過(guò)氧化物酶體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體、最后為核蛋白體。
由于各種細(xì)胞器在大小和密度上相互重疊,而且某些慢沉降顆粒常常被快沉降顆粒裹到沉淀塊中,一般重復(fù)2~3次效果會(huì)好一些。差速離心只用于分離大小懸殊的細(xì)胞,更多用于分離細(xì)胞器。
通過(guò)差速離心可將細(xì)胞器初步分離,常需進(jìn)一步通過(guò)密度梯離心再行分離純化。(二)、密度梯度離心(density gradient centrifugation)用一定的介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度,將細(xì)胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部,通過(guò)重力或離心力場(chǎng)的作用使細(xì)胞分層、分離。
這類(lèi)分離又可分為速度沉降和等密度沉降平衡兩種(圖2-23)。密度梯度離心常用的介質(zhì)為氯化銫,蔗糖和多聚蔗糖。
分離活細(xì)胞的介質(zhì)要求:1)能產(chǎn)生密度梯度,且密度高時(shí),粘度不高;2)PH中性或易調(diào)為中性;3)濃度大時(shí)滲透壓不大;4)對(duì)細(xì)胞無(wú)毒。
聲明:本網(wǎng)站尊重并保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán),根據(jù)《信息網(wǎng)絡(luò)傳播權(quán)保護(hù)條例》,如果我們轉(zhuǎn)載的作品侵犯了您的權(quán)利,請(qǐng)?jiān)谝粋€(gè)月內(nèi)通知我們,我們會(huì)及時(shí)刪除。
蜀ICP備2020033479號(hào)-4 Copyright ? 2016 學(xué)習(xí)鳥(niǎo). 頁(yè)面生成時(shí)間:3.494秒