通常獲得目的基因的方法(獲得目的基因有幾種主要方法)
1.獲得目的基因有幾種主要方法
獲得目的基因常用的方法有PCR法、化學(xué)合成法、cDNA法及建立基因文庫(kù)的方法來(lái)篩選
直接獲取
1.從基因文庫(kù)中獲取 這個(gè)沒(méi)什么就是現(xiàn)成的基因儲(chǔ)存在受體菌上你用的時(shí)候提取出來(lái)就好了（基因組文庫(kù)法 就是原教材中的用限制性?xún)?nèi)切酶直接獲取。利用λ噬菌體載體構(gòu)建基因組文庫(kù)的一般操作程序如下：① 選用特定限制性?xún)?nèi)切酶， DNA進(jìn)行部分酶解，得到DNA限制性片段② 選用適當(dāng)?shù)南拗菩詢(xún)?nèi)切酶酶解λ噬菌體載體DNA。③ 經(jīng)適當(dāng)處理，將基因組DNA限制性片段與λ噬菌體載體進(jìn)行體外重組。④ 利用體外包裝系統(tǒng)將重組體包裝成完整的顆粒。⑤ 以重組噬菌體顆粒侵染大腸桿菌，形成大量噬菌斑，從而形成含有整個(gè)DNA的重組DNA群體，即文庫(kù)。）經(jīng)典解釋
2.cDNA文庫(kù)法（即原教材中提到的逆轉(zhuǎn)錄法）。cDNA文庫(kù)，是指匯集以某生物成熟mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA序列的重組DNA群體。雖然可用基因組文庫(kù)法來(lái)獲取真核生物的目的基因，但是由于高等真核生物基因組DNA文庫(kù)比其cDNA文庫(kù)大得多，相關(guān)工作量同樣大得多。更為重要的是，在真核生物基因組中合有大量的間隔序列或內(nèi)含子，但在大腸桿菌等原核生物中沒(méi)有類(lèi)似序列的存在，所以大腸桿菌不能從真核生物基因的初級(jí)轉(zhuǎn)錄本中去除間隔序列，即不能表達(dá)真核生物DNA。而在真核生物成熟mRNA中已不存在間隔序列（已在拼接過(guò)程中被去除），所以可以以真核生物成熟mRNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA可被大腸桿菌表達(dá)。因此，在基因工程中，cDNA文庫(kù)法是從真核生物細(xì)胞中分離目的基因的常用方法。
3.直接分離基因最常用的方法是“鳥(niǎo)槍法”，又叫“散彈射擊法”。這種方法有如用獵槍發(fā)射的散彈打鳥(niǎo)，無(wú)論哪一顆彈粒擊中目標(biāo)，都能把鳥(niǎo)打下來(lái)。鳥(niǎo)槍法的具體做法是：用限制酶（即限制性?xún)?nèi)切酶）將供體細(xì)胞中的DNA切成許多片段，將這些片段分別載入運(yùn)載體，然后通過(guò)運(yùn)載體分別轉(zhuǎn)入不同的受體細(xì)胞，讓供體細(xì)胞所提供的DNA（外源DNA）的所有片段分別在受體細(xì)胞中大量復(fù)制（在遺傳學(xué)中叫做擴(kuò)增），從中找出含有目的基因的細(xì)胞，再用一定的方法吧帶有目的基因的DNA片段分離出來(lái)。如許多抗蟲(chóng)，抗病毒的基因都可以用上述方法獲得。
用“鳥(niǎo)槍法”獲取目的基因的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，缺點(diǎn)是工作量大，具有一定的盲目性。
人工合成
1.（主要是序列已知的基因）。主要是通過(guò)DNA自動(dòng)合成儀，通過(guò)固相亞磷酸酰胺法合成，具體過(guò)程可以網(wǎng)上查詢(xún)，反正是可以按照已知序列將核苷酸一個(gè)一個(gè)連接上去成為核苷酸序列，一般適于分子較小而不易獲得的基因。對(duì)于大的基因一般是先用化學(xué)合成法合成引物，再利用引物獲得目的基因。
2.聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction ,PCR）是80年代中期發(fā)展起來(lái)的體外核酸擴(kuò)增技術(shù)。它具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、易自動(dòng)化等突出優(yōu)點(diǎn)；能在一個(gè)試管內(nèi)將所要研究 的目的基因或某一DNA片段于數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增至十萬(wàn)乃至百萬(wàn)倍，使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發(fā)、一滴血、甚至一個(gè)細(xì)胞中擴(kuò)增出足量的DNA供分析研 究和檢測(cè)鑒定。過(guò)去幾天幾星期才能做到的事情，用PCR幾小時(shí)便可完成。PCR技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的一項(xiàng)革命性創(chuàng)舉和里程碑
2.獲取目的基因的方法有哪些（詳細(xì)）
原發(fā)布者：最后一抹夕陽(yáng)88
第四章目的基因的獲得目的基因?準(zhǔn)備要分離、改造、擴(kuò)增或表達(dá)的基因。編碼某種蛋白質(zhì)研究某基因與疾病的關(guān)系研究某基因結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系一、基因的基本結(jié)構(gòu)特征一個(gè)能轉(zhuǎn)錄、翻譯的結(jié)構(gòu)基因依次包括以下幾部分：轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)區(qū)、核糖體識(shí)別區(qū)、編碼區(qū)（包括起始密碼子ATG、開(kāi)放閱讀框、終止密碼子TAG、TAA或TGA）和轉(zhuǎn)錄終止區(qū)。（一）原核生物基因的組成——操縱子?啟動(dòng)子：RNA聚合酶識(shí)別、結(jié)合和開(kāi)始轉(zhuǎn)錄的片段；?SD區(qū)：糖體16SrRNA識(shí)別、結(jié)合mRNA的位置；?轉(zhuǎn)錄終止子和終止因子：分別指基因或操縱子3'端提供轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)的DNA序列；協(xié)助mRNA聚合酶識(shí)別終止信號(hào)的輔助蛋白。?原核的終止子在終止點(diǎn)之前有一回文結(jié)構(gòu)，轉(zhuǎn)錄物形成莖環(huán)發(fā)夾。（二）真核生物基因的組成?基因區(qū)：ATG+extrons+introns+TAA(TGA或TAG)?轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)區(qū)：編碼蛋白的啟動(dòng)子（RNA聚合酶Ⅱ識(shí)別）可尋找三個(gè)保守區(qū)：TATAA/TA區(qū)（Hogness框）、CAAT框、GC框。?轉(zhuǎn)錄終止區(qū)：真核生物轉(zhuǎn)錄的終止信號(hào)并不清楚。二、目的基因的獲得方法?目前克隆目的基因常用的方法有四種方法：化學(xué)合成法、cDNA文庫(kù)法、PCR法和RT-PCR法。（一）化學(xué)合成法?將已知序列的目的基因利用化學(xué)合成的方法直接合成。?特點(diǎn)：①只能合成小于100個(gè)堿基特定序列；②自動(dòng)化程度較高；③合成速度較快。?方法：磷酸二酯法、磷酸三酯法、固相亞磷酸三酯法化學(xué)合成法的用途?合成天然基因
3.獲取目的基因的常用方法是哪種
..剛好學(xué)到
基因工程流程的第一步就是獲得目的DNA片段，如何獲得目的DNA片段就成為基因工程的關(guān)鍵問(wèn)題。所需目的基因的來(lái)源，不外乎是分離自然存在的基因或人工合成基因。常用的方法有PCR法、化學(xué)合成法、cDNA法及建立基因文庫(kù)的方法來(lái)篩選
直接獲取
1.從基因文庫(kù)中獲取 這個(gè)沒(méi)什么就是現(xiàn)成的基因儲(chǔ)存在受體菌上你用的時(shí)候提取出來(lái)就好了（基因組文庫(kù)法 就是原教材中的用限制性?xún)?nèi)切酶直接獲取。利用λ噬菌體載體構(gòu)建基因組文庫(kù)的一般操作程序如下：① 選用特定限制性?xún)?nèi)切酶， DNA進(jìn)行部分酶解，得到DNA限制性片段② 選用適當(dāng)?shù)南拗菩詢(xún)?nèi)切酶酶解λ噬菌體載體DNA。③ 經(jīng)適當(dāng)處理，將基因組DNA限制性片段與λ噬菌體載體進(jìn)行體外重組。④ 利用體外包裝系統(tǒng)將重組體包裝成完整的顆粒。⑤ 以重組噬菌體顆粒侵染大腸桿菌，形成大量噬菌斑，從而形成含有整個(gè)DNA的重組DNA群體，即文庫(kù)。）經(jīng)典解釋
2.cDNA文庫(kù)法（即原教材中提到的逆轉(zhuǎn)錄法）。cDNA文庫(kù)，是指匯集以某生物成熟mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA序列的重組DNA群體。雖然可用基因組文庫(kù)法來(lái)獲取真核生物的目的基因，但是由于高等真核生物基因組DNA文庫(kù)比其cDNA文庫(kù)大得多，相關(guān)工作量同樣大得多。更為重要的是，在真核生物基因組中合有大量的間隔序列或內(nèi)含子，但在大腸桿菌等原核生物中沒(méi)有類(lèi)似序列的存在，所以大腸桿菌不能從真核生物基因的初級(jí)轉(zhuǎn)錄本中去除間隔序列，即不能表達(dá)真核生物DNA。而在真核生物成熟mRNA中已不存在間隔序列（已在拼接過(guò)程中被去除），所以可以以真核生物成熟mRNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA可被大腸桿菌表達(dá)。因此，在基因工程中，cDNA文庫(kù)法是從真核生物細(xì)胞中分離目的基因的常用方法。
3.直接分離基因最常用的方法是“鳥(niǎo)槍法”，又叫“散彈射擊法”。這種方法有如用獵槍發(fā)射的散彈打鳥(niǎo)，無(wú)論哪一顆彈粒擊中目標(biāo)，都能把鳥(niǎo)打下來(lái)。鳥(niǎo)槍法的具體做法是：用限制酶（即限制性?xún)?nèi)切酶）將供體細(xì)胞中的DNA切成許多片段，將這些片段分別載入運(yùn)載體，然后通過(guò)運(yùn)載體分別轉(zhuǎn)入不同的受體細(xì)胞，讓供體細(xì)胞所提供的DNA（外源DNA）的所有片段分別在受體細(xì)胞中大量復(fù)制（在遺傳學(xué)中叫做擴(kuò)增），從中找出含有目的基因的細(xì)胞，再用一定的方法吧帶有目的基因的DNA片段分離出來(lái)。如許多抗蟲(chóng)，抗病毒的基因都可以用上述方法獲得。
用“鳥(niǎo)槍法”獲取目的基因的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，缺點(diǎn)是工作量大，具有一定的盲目性。
人工合成
1.（主要是序列已知的基因）。主要是通過(guò)DNA自動(dòng)合成儀，通過(guò)固相亞磷酸酰胺法合成，具體過(guò)程可以網(wǎng)上查詢(xún)，反正是可以按照已知序列將核苷酸一個(gè)一個(gè)連接上去成為核苷酸序列，一般適于分子較小而不易獲得的基因。對(duì)于大的基因一般是先用化學(xué)合成法合成引物，再利用引物獲得目的基因。
2.聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction ,PCR）是80年代中期發(fā)展起來(lái)的體外核酸擴(kuò)增技術(shù)。它具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、易自動(dòng)化等突出優(yōu)點(diǎn)；能在一個(gè)試管內(nèi)將所要研究 的目的基因或某一DNA片段于數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增至十萬(wàn)乃至百萬(wàn)倍，使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發(fā)、一滴血、甚至一個(gè)細(xì)胞中擴(kuò)增出足量的DNA供分析研 究和檢測(cè)鑒定。過(guò)去幾天幾星期才能做到的事情，用PCR幾小時(shí)便可完成。PCR技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的一項(xiàng)革命性創(chuàng)舉和里程碑
他只是給目的基因的擴(kuò)增
好累~。.
4.獲得目的基因的方法
化學(xué)合成法（主要是序列已知的基因）。主要是通過(guò)DNA自動(dòng)合成儀，通過(guò)固相亞磷酸酰胺法合成，具體過(guò)程可以網(wǎng)上查詢(xún)，反正是可以按照已知序列將核苷酸一個(gè)一個(gè)連接上去成為核苷酸序列，一般適于分子較小而不易獲得的基因。對(duì)于大的基因一般是先用化學(xué)合成法合成引物，再利用引物獲得目的基因。
2、基因組文庫(kù)法（就是原教材中的用限制性?xún)?nèi)切酶直接獲取法）。利用λ噬菌體載體構(gòu)建基因組文庫(kù)的一般操作程序如下：① 選用特定限制性?xún)?nèi)切酶， DNA進(jìn)行部分酶解，得到DNA限制性片段② 選用適當(dāng)?shù)南拗菩詢(xún)?nèi)切酶酶解λ噬菌體載體DNA。③ 經(jīng)適當(dāng)處理，將基因組DNA限制性片段與λ噬菌體載體進(jìn)行體外重組。④ 利用體外包裝系統(tǒng)將重組體包裝成完整的顆粒。⑤ 以重組噬菌體顆粒侵染大腸桿菌，形成大量噬菌斑，從而形成含有整個(gè)DNA的重組DNA群體，即文庫(kù)。
3、cDNA文庫(kù)法（即原教材中提到的逆轉(zhuǎn)錄法）。cDNA文庫(kù)，是指匯集以某生物成熟mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA序列的重組DNA群體。雖然可用基因組文庫(kù)法來(lái)獲取真核生物的目的基因，但是由于高等真核生物基因組DNA文庫(kù)比其cDNA文庫(kù)大得多，相關(guān)工作量同樣大得多。更為重要的是，在真核生物基因組中合有大量的間隔序列或內(nèi)含子，但在大腸桿菌等原核生物中沒(méi)有類(lèi)似序列的存在，所以大腸桿菌不能從真核生物基因的初級(jí)轉(zhuǎn)錄本中去除間隔序列，即不能表達(dá)真核生物DNA。而在真核生物成熟mRNA中已不存在間隔序列（已在拼接過(guò)程中被去除），所以可以以真核生物成熟mRNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA可被大腸桿菌表達(dá)。因此，在基因工程中，cDNA文庫(kù)法是從真核生物細(xì)胞中分離目的基因的常用方法。
