微生物顯微觀(guān)察時(shí)制片方法(怎么制作微生物的制片,然后用顯微鏡觀(guān)察)

1.怎么制作微生物的制片,然后用顯微鏡觀(guān)察

(1) 以油性簽字筆在載玻片之背面畫(huà)個(gè)圈 并寫(xiě)上所要鑒定之細菌的名稱(chēng)。

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(2) 在圓圈正面滴上一滴水，水滴越小滴越好，如有需要，可將多馀的水

擦去。

(3) 用牙簽沾取一點(diǎn)菌落涂于載玻片正面的圓圈中（勿沾取太多的細菌）。

(4) 待涂布的菌液完全風(fēng)乾后（切記不可用火燒乾，以免破壞細菌細胞壁的

結構），讓載玻片在火上來(lái)回數次，使細菌固定（每次通過(guò)火焰后均需

稍冷卻，載玻片之溫度以不燙手為原則）。

一）正置顯微鏡

1、安放

右手握住鏡臂，左手托住鏡座，使鏡體保持直立。桌面要清潔、平穩，要選擇臨窗或光線(xiàn)充足的地方。單筒的一般放在左側，距離桌邊3~4厘米處。

2、清潔

檢查顯微鏡是否有毛病，是否清潔，鏡身機械部分可用干凈軟布擦拭。透鏡要用擦鏡紙擦拭，如有膠或粘污，可用少量二甲苯清潔之。

3、對光

鏡筒升至距載物臺1~2厘米處，低倍鏡對準通光孔。調節光圈和反光鏡，光線(xiàn)強時(shí)用平面鏡，光線(xiàn)弱時(shí)用凹面鏡，反光鏡要用雙手轉動(dòng)。

若使用的為帶有光源的顯微鏡，可省去次步驟，但需要調節光亮度的旋鈕。

4、安裝標本

將玻片放在載物臺上，注意有蓋玻片的一面一定朝上。用彈簧夾將玻片固定，轉動(dòng)平臺移動(dòng)器的旋鈕，使要觀(guān)察的材料對準通光孔中央。

5、調焦

調焦時(shí)，先旋轉粗調焦旋鈕慢慢降低鏡筒，并從側面仔細觀(guān)察，直到物鏡貼近玻片標本，然后左眼自目鏡觀(guān)察，左手旋轉粗調焦旋鈕抬升鏡筒，直到看清標本物像時(shí)停止，再用細調焦旋鈕回調清晰。

操作注意：不應在高倍鏡下直接調焦；鏡筒下降時(shí)，應從側面觀(guān)察鏡筒和標本間的間距；要了解物距的臨界值。

若使用雙筒顯微鏡，如觀(guān)察者雙眼視度有差異，可靠視度調節圈調節。另外雙筒可相對平移以適應操作者兩眼間距。

6、觀(guān)察

若使用單筒顯微鏡，兩眼自然張開(kāi)，左眼觀(guān)察標本，右眼觀(guān)察記錄及繪圖，同時(shí)左手調節焦距，使物象清晰并移動(dòng)標本視野。右手記錄、繪圖。

鏡檢時(shí)應將標本按一定方向移動(dòng)視野，直至整個(gè)標本觀(guān)察完畢，以便不漏檢，不重復。

光強的調節：一般情況下，染色標本光線(xiàn)宜強，無(wú)色或未染色標本光線(xiàn)宜弱；低倍鏡觀(guān)察光線(xiàn)宜弱，高倍鏡觀(guān)察光線(xiàn)宜強。除調節反光鏡或光源燈以外，虹彩光圈的調節也十分重要。

(1)低倍鏡觀(guān)察

觀(guān)察任何標本時(shí)，都必須先使用低倍鏡，因為其視野大，易發(fā)現目標和確定要觀(guān)察的部位。

(2)高倍鏡觀(guān)察

從低倍鏡轉至高倍時(shí)，只需略微調動(dòng)細調焦旋鈕，即可使物像清晰。

使用高倍鏡時(shí)切勿使用粗調焦旋鈕，否則易壓碎蓋玻片并損傷鏡頭。

轉動(dòng)物鏡轉換器時(shí)，不可用手指直接推轉物鏡，這樣容易使物鏡的光軸發(fā)生偏斜，轉換器螺紋受力不均勻而破壞，最后導致轉換器就會(huì )報廢。

(3)油鏡的觀(guān)察

先用低倍鏡及高倍鏡將被檢物體移至視野中央后，再換油鏡觀(guān)察。油鏡觀(guān)察前，應將顯微鏡亮度調整至最亮，光圈完全打開(kāi)。

使用油鏡時(shí)，先在蓋玻片上滴加一滴香柏油（鏡油），然后降低鏡筒并從側面仔細觀(guān)察，直到油鏡浸入香柏油并貼近玻片標本，然后用目鏡觀(guān)察，并用細調焦旋鈕抬升鏡筒，直到看清標本的焦段時(shí)停止并調節清晰。

香柏油滴加要適量。油鏡使用完畢后一定要用擦鏡紙沾取二甲苯擦去香柏油，并再用干的擦鏡紙擦去多余二甲苯。

7、結束操作

觀(guān)察完畢，移去樣品，扭轉轉換器，使鏡頭V字型偏于兩旁，反光鏡要豎立，降下鏡筒，擦抹干凈，并套上鏡套。

若使用的是帶有光源的顯微鏡，需要調節亮度旋鈕將光亮度調至最暗，再關(guān)閉電源按鈕，以防止下次開(kāi)機時(shí)瞬間過(guò)強電流燒壞光源燈

2.敘述細菌,放線(xiàn)菌,酵母菌,霉菌的光學(xué)顯微鏡制片方法

一、細菌制片及簡(jiǎn)單染色：

1、涂片

取潔凈的載玻片1張，將其在火焰上微微加熱，除去上面的油脂，冷卻，在中央部位滴加一滴無(wú)菌水，用接種環(huán)在火焰旁從培養基上挑取少量菌體與水混合。用接種環(huán)將菌體涂成直徑約1cm的均勻薄層。注意，取菌量不宜過(guò)大，一面造成軍體重疊。

2、干燥

放在桌面上，待其自然干燥。

3、固定

將已干燥的涂片標本向上，在火焰上通過(guò)3-4次固定。其目的是殺死細菌；使菌體蛋白質(zhì)凝固，菌體牢固粘附于載玻片上，染色時(shí)不被染液或水沖掉；增加菌體對染料的結合力，使圖片易著(zhù)色。

4、染色

在涂片上滴加染料1-2滴，使其布滿(mǎn)涂菌部分，染色1分鐘。

5、沖洗

斜置玻片，傾去染液。用水輕輕沖去染液，至流水變清。注意水流不能直接沖洗涂菌處，以免將涂菌沖洗掉。

6、吸干

用吸水紙輕輕吸去玻片上的水分，干燥后鏡檢。

二、酵母菌制片及簡(jiǎn)單染色。

水—碘液浸片法。將革蘭氏染色用碘液用水稀釋4倍后，滴加一滴于載破片中央，無(wú)菌操

作取少許菌體置于染色中混勻，蓋上破片后鏡劍。

三、放線(xiàn)菌制片方法（插片法）

1、在馬鈴薯浸汁瓊脂培養基平板上，劃線(xiàn)接入少量放線(xiàn)菌的孢子，在接種線(xiàn)旁?xún)A斜地插入無(wú)菌蓋玻片，于28-30℃培養。

2、培養3~4天后，菌絲沿著(zhù)蓋玻片向上生長(cháng)，待菌絲長(cháng)好后，取出蓋玻片放在干凈的載玻片上，置于顯微鏡下觀(guān)察。

四、霉菌制片法

水浸制片法：

1、在載玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉藍染色液或蒸餾水。

2、用解剖針從生長(cháng)有霉菌的斜面挑取少量帶有孢子的霉菌菌絲，用50%的乙醇浸潤，再用蒸餾水將浸過(guò)的菌絲洗一下，然后放入載玻片上的液滴中，仔細地用解剖針將菌絲分散開(kāi)來(lái)。（也可省略酒精和水浸潤，洗滌）

3、注意取菌時(shí)，毛霉和根霉用解剖針挑取少量菌絲即可，青霉和黑曲霉和培養基結合緊密，不易挑取，可連培養基一起挑取，再在染液中分離菌絲。青霉和曲霉的培養時(shí)間不宜過(guò)長(cháng)，一般為2-2.5天，以免菌絲與培養基不好剝離。

4、蓋上蓋玻片（勿使產(chǎn)生氣泡，且不要再移動(dòng)蓋玻片）。（黑曲霉不易觀(guān)察到足細胞）

5、鏡檢：先用低倍鏡，必要時(shí)轉換高倍鏡鏡檢并記錄觀(guān)察結果。

3.觀(guān)察微生物時(shí)使用顯微鏡的正確步驟

一、安放 1.右手握住鏡臂，左手托住鏡座。

2.把顯微鏡放在實(shí)驗臺上，略偏左（顯微鏡放在距實(shí)驗臺邊緣7厘米左右處）。安裝好目鏡和物鏡。

二、對光 3.轉動(dòng)轉換器，使低倍物鏡對準通光孔（物鏡的前端與載物臺要保持2厘 米的距離）。 4.把一個(gè)較大的光圈對準通光孔。

左眼注視目鏡內（右眼睜開(kāi)，同時(shí)畫(huà)圖）。轉動(dòng)反光鏡，使光線(xiàn)通過(guò)通光孔反射到鏡筒內。

通過(guò)目鏡，可以看到白亮的視野。 三、觀(guān)察 5.把所要觀(guān)察的玻片標本放在載物臺上，用壓片夾壓住，標本要正對通光孔的中心。

6.轉動(dòng)粗準焦螺旋，使鏡筒緩緩下降，直到物鏡接近玻片標本為止（眼睛看著(zhù)物鏡，以免物鏡碰到玻片標本）。 7.左眼向目鏡內看，同時(shí)逆時(shí)針轉動(dòng)粗準焦螺旋，使鏡筒緩緩上升，直到看清物像為止。

再略微轉動(dòng)細準焦螺旋，使看到的物像更加清晰。 四、清潔收鏡 把顯微鏡的外表擦拭干凈。

轉動(dòng)轉換器，把兩個(gè)物鏡偏到兩旁，并將鏡筒緩緩下降到最低處。最后把顯微鏡放進(jìn)鏡箱里，送回原處。

ok了吧。

4.用顯微鏡觀(guān)察細菌的步驟

一、用臟手上的細菌制裝片：

1、收集手上細菌，用少量無(wú)菌水（可用冷開(kāi)水代替）沖洗臟手，讓洗手的水流到培養皿中。這些臟水就是細菌培養液。

2、制取細菌裝片，取甲、乙兩塊潔凈的載玻片，分別在兩玻片的中央各滴一小滴細菌培養液；然后在甲片上蓋好蓋玻片后直接用600倍的顯微鏡觀(guān)察。

（用稍偏暗的視野，調節到位可以看到多種細菌和其它微生物。很容易看到活動(dòng)的微生物，這樣對兒童更有吸引力和教育意義。）如果你想進(jìn)一步放大并會(huì )操作，選定觀(guān)察的物象后，可把此物象移到視野正中央，再轉換更高倍數的鏡頭觀(guān)察即可。

3、在乙片的細菌培養液滴上滴一小滴龍膽紫染色液，用牙簽將細菌培養液和龍膽紫液攪勻、并將液滴推開(kāi)，再用酒精燈加熱液滴（約5秒鐘）后讓它自然晾干（約5分鐘）。

再用600倍的顯微鏡直接觀(guān)察，既可以看到染成深藍色的多種細菌和其它微生物。不過(guò)此時(shí)看到的微生物都已死亡、并被固定，因此看不到它們的活動(dòng)狀態(tài)。

二、制取洗手后的對照裝片。

1、洗手-----將手用香皂洗干凈，用潔凈的干毛巾揩干手；

2、收集細菌培養液-------用少量無(wú)菌水沖洗雙手，讓洗手液流入潔凈的培養皿中；

3、制細菌裝片-----制片過(guò)程與以上裝片過(guò)程相同，參照制片即可。

擴展資料：

細菌的基本形態(tài)與大小

(1)球菌：

球菌是外形呈圓球形或橢圓形的細菌，直徑0.5~1微米，有以下幾種類(lèi)型：

①單球菌：?jiǎn)为毚嬖冢缒蛩匦∏蚓虎陔p球菌：如肺炎雙球菌；

③鏈球菌：如乳酸鏈球菌；④四聯(lián)球菌：形成的4個(gè)細胞排列在一起，成田字，如四聯(lián)球菌；

⑤八疊球菌：如尿素生孢八疊球菌；⑥葡萄球菌：如金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）。

(2)桿菌：

外形為桿狀的細菌稱(chēng)桿菌，常有長(cháng)寬接近的短桿或球桿狀菌，如甲烷短桿菌屬（Methano—brevibacter）;

長(cháng)寬相差較大的棒桿狀或長(cháng)桿狀菌，如枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）、梭狀桿菌（Bacteriumfusiformis）;

分枝狀或叉狀菌，如雙歧桿菌屬（Bifidobacterium）；竹節狀（兩端平截），如炭疽芽孢桿菌（Bacillusanthracis）等。

按桿菌細胞的排列方式不同則有成對的雙桿菌、呈鏈狀的鏈桿菌，另外，常有柵狀、“八”字狀以及由鞘衣包裹在一起的絲狀等多種。典型的桿菌有大腸桿菌、枯草桿菌、鏈桿菌、變形桿菌[2]。

(3)螺旋狀：

螺旋狀的細菌稱(chēng)螺旋菌，一般長(cháng)5~50微米，寬0.5~5微米，根據菌體的彎曲可分為：

①弧菌（Vibrio）：螺旋不足一環(huán)者呈香蕉狀或逗點(diǎn)狀，如霍亂弧菌（Vibriocholerae）；②螺菌（Spirillum）：滿(mǎn)2~6環(huán)的小型、堅硬的螺旋狀細菌，如小螺菌（Spirillumminor）;

③螺旋體（Spirochaeta）：旋轉周數多（通常超過(guò)6環(huán)）、體長(cháng)而柔軟的螺旋狀細菌，如梅毒螺旋體（TreponemaPallidum）。

參考資料來(lái)源：百度百科-細菌

5.制作細菌標本片是由哪幾個(gè)步驟

制作微生物玻片標本通常采用涂片法，微生物包括細菌和真菌（或包括病毒），細菌個(gè)體小，通常用涂片法制作玻片標本。涂片法是裝片法制作玻片標本的一種方法。制作方法是，細菌可以用細菌液直接涂布在載玻片上，蓋上蓋片直接觀(guān)察或干燥后染色觀(guān)察，染色觀(guān)察通常需要洗去染色液后觀(guān)察。制作真菌標本可以采用涂片法、撕片法、貼片法和切片法，單細胞或孢子或菌絲采用涂片法，大型真菌有較大的組織塊，可以采用撕片法（如撕取一部分蘑菇絲）、貼片法（將蘑菇的菌褶貼到載片上）和切片法（切片的方式觀(guān)察蘑菇的結構）。

制作植物玻片標本方法很多，根據材料不同和觀(guān)察目的不同采用不同方法。涂片法（觀(guān)察果實(shí)營(yíng)養組織，如西瓜瓤）、撕片法（觀(guān)察洋蔥表皮、觀(guān)察導管）、切片法（觀(guān)察組織、器官結構）、磨片法（堅硬的果核磨成薄片觀(guān)察）。

切片法分為徒手切片、冰凍切片和石蠟切片等方法。

6.生物顯微鏡的幾種觀(guān)察方法都有什么作用

一.相差鏡檢法（Phasecontrast） 在光學(xué)顯微鏡的發(fā)展過(guò)程中，相差鏡檢術(shù)的發(fā)明成功，是近代顯微鏡技術(shù)中的重要成就.我們知道，人眼只能區分光波的波長(cháng)（顏色）和振幅（亮度），對于無(wú)色通明的生物標本，當光線(xiàn)通過(guò)時(shí)，波長(cháng)和振幅變化不大，在明場(chǎng)觀(guān)察時(shí)很難觀(guān)察到標本. 相差顯微鏡利用被檢物體的光程之差進(jìn)行鏡檢，也就是有效地利用光的干涉現象，將人眼不可分辨的相位差變?yōu)榭煞直娴恼穹睿词故菬o(wú)色透明的物質(zhì)也可成為清晰可見(jiàn).這大大便利了活體細胞的觀(guān)察，因此相差鏡檢法廣泛應用于倒置顯微鏡. 相差顯微鏡的基本原理是，把透過(guò)標本的可見(jiàn)光的光程差變成振幅差，從而提高了各種結構間的對比度，使各種結構變得清晰可見(jiàn).光線(xiàn)透過(guò)標本后發(fā)生折射，偏離了原來(lái)的光路，同時(shí)被延遲了1/4λ（波長(cháng)），如果再增加或減少1/4λ，則光程差變?yōu)?/2λ，兩束光合軸后干涉加強，振幅增大或減下，提高反差.在構造上，相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡兩個(gè)特殊之處： 1.環(huán)形光闌（annulardiaphragm）位于光源與聚光器之間，作用是使透過(guò)聚光器的光線(xiàn)形成空心光錐，焦聚到標本上. 2.相位板（annularphaseplate）在物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ.分為兩種： 1.A+相板：將直射光推遲1/4λ，兩組光波合軸后光波相加，振幅加大，標本結構比周?chē)橘|(zhì)更加變亮，形成亮反差（或稱(chēng)負反差）. 2.B+相板：將衍射光推遲1/4λ，兩組光線(xiàn)合軸后光波相減，振幅變小，形成暗反差（或稱(chēng)正反差），結構比周?chē)橘|(zhì)更加變暗 二.暗視野觀(guān)察（Darkfield） 暗視野實(shí)際是暗場(chǎng)照明發(fā).它的特點(diǎn)和明視野不同，不直接觀(guān)察到照明的光線(xiàn)，而觀(guān)察到的是被檢物體反射或衍射的光線(xiàn).因此，視場(chǎng)成為黑暗的背景，而被檢物體則呈現明亮的象. 暗視野的原理是根據光學(xué)上的丁道爾現象，微塵在強光直射通過(guò)的情況下，人眼不能觀(guān)察，這是因為強光繞射造成的.若把光線(xiàn)斜射它，由于光的反射，微粒似乎增大了體積，為人眼可見(jiàn). m..m暗視野觀(guān)察所需要的特殊附件是暗視野聚光鏡.它的特點(diǎn)是不讓光束由下至上的通過(guò)被檢物體，而是將光線(xiàn)改變途徑，使其斜射向被檢物體，使照明光線(xiàn)不直接進(jìn)入物鏡，利用被檢物體表面反射或衍射光形成的明亮圖象.暗視野觀(guān)察的分辨率遠高于明視野觀(guān)察，最高達0.02—0.004 三.明視野觀(guān)察（Brightfield） 明視野鏡檢是大家比較熟悉的一種鏡檢方式，廣泛應用于病理、檢驗，用于觀(guān)察被染色的切片，所有顯微鏡均能完成此功能. 四.偏光顯微鏡（Polarizingmicroscope） 偏光顯微鏡的特點(diǎn) 偏光顯微鏡是鑒定物質(zhì)細微結構光學(xué)性質(zhì)的一種顯微鏡.凡具有雙折射的物質(zhì)，在偏光顯微鏡下就能分辨的清楚，當然這些物質(zhì)也可用染色發(fā)來(lái)進(jìn)行觀(guān)察，但有些則不可能，而必須利用偏光顯微鏡. 偏光顯微鏡的特點(diǎn)，就是將普通改變?yōu)槠膺M(jìn)行鏡檢的方法，以鑒別某一物質(zhì)是單折射（各向同行）或雙折射性（各向異性）. 雙折射性是晶體的基本特性.因此，偏光顯微鏡被廣泛地應用在礦物，化學(xué)等領(lǐng)域.在生物學(xué)和植物學(xué)也有應用. 五.微分干涉稱(chēng)鏡檢術(shù)（） 微分干涉鏡檢術(shù)出現于60年代，它不僅能觀(guān)察無(wú)色透明的物體，而且圖象呈現出浮雕壯的立體感，并具有相襯鏡檢術(shù)所不能達到的某些優(yōu)點(diǎn)，觀(guān)察效果更為逼真. 原理； 微分干涉稱(chēng)鏡檢術(shù)是利用特制的渥拉斯頓棱鏡來(lái)分解光束.分裂出來(lái)的光束的振動(dòng)方向相互垂直且強度相等，光束分別在距離很近的兩點(diǎn)上通過(guò)被檢物體，在相位上略有差別.由于兩光束的裂距極小，而不出現重影現象，使圖象呈現出立體的三維感覺(jué). DIC顯微鏡的物理原理完全不同于相差顯微鏡，技術(shù)設計要復雜得多.DIC利用的是偏振光，有四個(gè)特殊的光學(xué)組件：偏振器（polarizer）、DIC棱鏡、DIC滑行器和檢偏器（analyzer）.偏振器直接裝在聚光系統的前面，使光線(xiàn)發(fā)生線(xiàn)性偏振.在聚光器中則安裝了偌瑪斯斯棱鏡，即DIC棱鏡，此棱鏡可將一束光分解成偏振方向不同的兩束光（x和y），二者成一小夾角.聚光器將兩束光調整成與顯微鏡光軸平行的方向.最初兩束光相位一致，在穿過(guò)標本相鄰的區域后，由于標本的厚度和折射率不同，引起了兩束光發(fā)生了光程差.在物鏡的后焦面處安裝了第二個(gè)偌瑪斯斯棱鏡，即DIC滑行器，它把兩束光波合并成一束. 這時(shí)兩束光。