蛋白質(zhì)分離層析方法(蛋白質(zhì)分離純化的四種方法)
1.蛋白質(zhì)分離純化的四種方法
1、鹽析法：
鹽析法的根據是蛋白質(zhì)在稀鹽溶液中，溶解度會(huì )隨鹽濃度的增高而上升，但當鹽濃度增高到一定數值時(shí)，使水活度降低，進(jìn)而導致蛋白質(zhì)分子表面電荷逐漸被中和，水化膜逐漸被破壞，最終引起蛋白質(zhì)分子間互相凝聚并從溶液中析出。
2、有機溶劑沉淀法：
有機溶劑能降低蛋白質(zhì)溶解度的原因有二：其一、與鹽溶液一樣具有脫水作用；其二、有機溶劑的介電常數比水小，導致溶劑的極性減小。
3、蛋白質(zhì)沉淀劑：
蛋白質(zhì)沉淀劑僅對一類(lèi)或一種蛋白質(zhì)沉淀起作用，常見(jiàn)的有堿性蛋白質(zhì)、凝集素和重金屬等。
4、聚乙二醇沉淀作用：
聚乙二醇和右旋糖酐硫酸鈉等水溶性非離子型聚合物可使蛋白質(zhì)發(fā)生沉淀作用。
擴展資料：
蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎，是有機大分子，是構成細胞的基本有機物，是生命活動(dòng)的主要承擔者。沒(méi)有蛋白質(zhì)就沒(méi)有生命。氨基酸是蛋白質(zhì)的基本組成單位。它是與生命及與各種形式的生命活動(dòng)緊密聯(lián)系在一起的物質(zhì)。
機體中的每一個(gè)細胞和所有重要組成部分都有蛋白質(zhì)參與。蛋白質(zhì)占人體重量的16%~20% ，即一個(gè)60kg重的成年人其體內約有蛋白質(zhì)9.6~12kg。
人體內蛋白質(zhì)的種類(lèi)很多，性質(zhì)、功能各異，但都是由20多種氨基酸（Amino acid）按不同比例組合而成的，并在體內不斷進(jìn)行代謝與更新。
參考資料來(lái)源：百度百科-蛋白質(zhì)分離純化
2.常用的蛋白質(zhì)分離純化方法有哪幾種
其中凝膠層析可用于測定蛋白質(zhì)的分子量；4）吸附性質(zhì).主要有離子交換層析：又稱(chēng)凝膠過(guò)濾法、電泳法分離蛋白質(zhì)混合物的各種方法主要是根據蛋白質(zhì)在溶液中的以下性質(zhì)，分布于不同的液層而分離.常見(jiàn)的分離提純蛋白質(zhì)的方法有：蛋白質(zhì)分子在高于或低于其pI的溶液中帶凈的負或正電荷.3：在蛋白質(zhì)溶液中加入大量中性鹽：利用混合物中各組分理化性質(zhì)的差異：利用透析袋膜的超濾性質(zhì)：1，因此在電場(chǎng)中可以移動(dòng).6.凡能與水以任意比例混合的有機溶劑，在相互接觸的兩相（固定相與流動(dòng)相）之間的分布不同而進(jìn)行分離.2、氯化鈉、超速離心.5，大分子蛋白質(zhì)不能進(jìn)入孔內而徑直流出、甲醇，均可引起蛋白質(zhì)沉淀.常用的中性鹽有，因此不同大小的蛋白質(zhì)得以分離，小分子蛋白質(zhì)進(jìn)入孔內，因而在柱中滯留時(shí)間較長(cháng)：硫酸銨，經(jīng)超速離心后，凝膠層析、鹽析與有機溶劑沉淀：1）分子大小.超速離心也可用來(lái)測定蛋白質(zhì)的分子量，溶液的pH在蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)處效果最好，以破壞蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)，稱(chēng)為鹽析、分子篩，如乙醇；3）電荷；2）溶解度，蛋白質(zhì)溶液加于柱之頂部.4、硫酸鈉等，吸附層析及親和層析等，使蛋白質(zhì)從溶液中沉淀析出、層析法，蛋白質(zhì)的分子量與其沉降系數S成正比、透析法.鹽析時(shí).電泳遷移率的大小主要取決于蛋白質(zhì)分子所帶電荷量以及分子大小、丙酮等；5）對其它分子的生物學(xué)親和力等進(jìn)行分離：利用物質(zhì)密度的不同，可將大分子物質(zhì)與小分子物質(zhì)分離開(kāi)，任其往下滲漏。
3.蛋白質(zhì)的分離方法有哪些
1.根據分子大小不同進(jìn)行分離純化 蛋白質(zhì)是一種大分子物質(zhì)，并且不同蛋白質(zhì)的分子大小不同，因此可以利用一些較簡(jiǎn)單的方法使蛋白質(zhì)和小分子物質(zhì)分開(kāi)，并使蛋白質(zhì)混合物也得到分離。
根據蛋白質(zhì)分子大小不同進(jìn)行分離的方法主要有透析、超濾、離心和凝膠過(guò)濾等。透析和超濾是分離蛋白質(zhì)時(shí)常用的方法。
透析是將待分離的混合物放入半透膜制成的透析袋中，再浸入透析液進(jìn)行分離。超濾是利用離心力或壓力強行使水和其它小分子通過(guò)半透膜，而蛋白質(zhì)被截留在半透膜上的過(guò)程。
這兩種方法都可以將蛋白質(zhì)大分子與以無(wú)機鹽為主的小分子分開(kāi)。它們經(jīng)常和鹽析、鹽溶方法聯(lián)合使用，在進(jìn)行鹽析或鹽溶后可以利用這兩種方法除去引入的無(wú)機鹽。
由于超濾過(guò)程中，濾膜表面容易被吸附的蛋白質(zhì)堵塞，以致超濾速度減慢，截流物質(zhì)的分子量也越來(lái)越小。所以在使用超濾方法時(shí)要選擇合適的濾膜，也可以選擇切向流過(guò)濾得到更理想的效果 離心也是經(jīng)常和其它方法聯(lián)合使用的一種分離蛋白質(zhì)的方法。
當蛋白質(zhì)和雜質(zhì)的溶解度不同時(shí)可以利用離心的方法將它們分開(kāi)。例如，在從大米渣中提取蛋白質(zhì)的實(shí)驗中，加入纖維素酶和α-淀粉酶進(jìn)行預處理后，再用離心的方法將有用物質(zhì)與分解掉的雜質(zhì)進(jìn)行初步分離[3]。
使蛋白質(zhì)在具有密度梯度的介質(zhì)中離心的方法稱(chēng)為密度梯度（區帶）離心。常用的密度梯度有蔗糖梯度、聚蔗糖梯度和其它合成材料的密度梯度。
可以根據所需密度和滲透壓的范圍選擇合適的密度梯度。密度梯度離心曾用于純化蘇云金芽孢桿菌伴孢晶體蛋白，得到的產(chǎn)品純度高但產(chǎn)量偏低。
蔣辰等[6]通過(guò)比較不同密度梯度介質(zhì)的分離效果，利用溴化鈉密度梯度得到了高純度的蘇云金芽孢桿菌伴孢晶體蛋白。凝膠過(guò)濾也稱(chēng)凝膠滲透層析，是根據蛋白質(zhì)分子大小不同分離蛋白質(zhì)最有效的方法之一。
凝膠過(guò)濾的原理是當不同蛋白質(zhì)流經(jīng)凝膠層析柱時(shí)，比凝膠珠孔徑大的分子不能進(jìn)入珠內網(wǎng)狀結構，而被排阻在凝膠珠之外，隨著(zhù)溶劑在凝膠珠之間的空隙向下運動(dòng)并最先流出柱外；反之，比凝膠珠孔徑小的分子后流出柱外。目前常用的凝膠有交聯(lián)葡聚糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠和瓊脂糖凝膠等。
在甘露糖蛋白提純的過(guò)程中使用凝膠過(guò)濾方法可以得到很好的效果，純度鑒定證明產(chǎn)品為分子量約為32 kDa、成分是多糖∶蛋白質(zhì)（88∶12）、多糖為甘露糖的單一均勻糖蛋白[1]。凝膠過(guò)濾在抗凝血蛋白的提取過(guò)程中也被用來(lái)除去大多數雜蛋白及小分子的雜質(zhì)[7]。
2.根據溶解度不同進(jìn)行分離純化 影響蛋白質(zhì)溶解度的外部條件有很多，比如溶液的pH值、離子強度、介電常數和溫度等。但在同一條件下，不同的蛋白質(zhì)因其分子結構的不同而有不同的溶解度，根據蛋白質(zhì)分子結構的特點(diǎn)，適當地改變外部條件，就可以選擇性地控制蛋白質(zhì)混合物中某一成分的溶解度，達到分離純化蛋白質(zhì)的目的。
常用的方法有等電點(diǎn)沉淀和pH值調節、蛋白質(zhì)的鹽溶和鹽析、有機溶劑法、雙水相萃取法、反膠團萃取法等。 等電點(diǎn)沉淀和pH值調節是最常用的方法。
每種蛋白質(zhì)都有自己的等電點(diǎn)，而且在等電點(diǎn)時(shí)溶解度最低；相反，有些蛋白質(zhì)在一定pH值時(shí)很容易溶解。因而可以通過(guò)調節溶液的pH值來(lái)分離純化蛋白質(zhì)。
王洪新等[8]研究茶葉蛋白質(zhì)提取過(guò)程發(fā)現，pH值為時(shí)茶葉蛋白提取效果最好，提取率達到36·8%，初步純化得率為91·0%。李殿寶[9]在從葵花脫脂粕中提取蛋白質(zhì)時(shí)將蛋白溶液的pH值調到3~4，使目標蛋白于等電點(diǎn)沉淀出來(lái)。
等電點(diǎn)沉淀法還應用于葡萄籽中蛋白質(zhì)的提取。李鳳英等[10]測得葡萄籽蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)為3·8。
他們利用堿溶法提取葡萄籽蛋白質(zhì)，得到了最佳的提取工藝為：以1*10-5mol·L-1的NaOH溶液，按1∶5的料液比，在40℃攪拌40 min，葡萄籽蛋白質(zhì)提取率達73·78%。另外還可以利用堿法提取大米蛋白，其持水性、吸油性和起泡性等均優(yōu)于酶法提取[11]。
利用酸法提取得到的鰱魚(yú)魚(yú)肉蛋白質(zhì)無(wú)腥味、色澤潔白，蛋白質(zhì)產(chǎn)率高達90%[12]。 蛋白質(zhì)的鹽溶和鹽析是中性鹽顯著(zhù)影響球狀蛋白質(zhì)溶解度的現象，其中，增加蛋白質(zhì)溶解度的現象稱(chēng)鹽溶，反之為鹽析。
應當指出，同樣濃度的二價(jià)離子中性鹽，如MgCl2、（NH4）2SO4對蛋白質(zhì)溶解度影響的效果，要比一價(jià)離子中性鹽如NaCl、NH4Cl大得多。在葡萄籽蛋白提取工藝中除了可以利用堿溶法還可以利用鹽溶法來(lái)提取蛋白質(zhì)，其最佳提取工藝是：以10%NaCl溶液，按1∶25的料液比，在30℃攪拌提取30min，蛋白質(zhì)提取率為57·25%[10]。
鹽析是提取血液中免疫球蛋白的常用方法，如多聚磷酸鈉絮凝法、硫酸銨鹽析法，其中硫酸銨鹽析法廣泛應用于生產(chǎn)。由于硫酸銨在水中呈酸性，為防止其對蛋白質(zhì)的破壞，應用氨水調pH值至中性。
為防止不同分子之間產(chǎn)生共沉淀現象，蛋白質(zhì)樣品的含量一般控制在0·2% ~2·0%。利用鹽溶和鹽析對蛋白質(zhì)進(jìn)行提純后，通常要使用透析或者凝膠過(guò)濾的方法除去中性鹽[13]。
有機溶劑提取法的原理是：與水互溶的有機溶劑（如甲醇、乙醇）能使一些蛋白質(zhì)在水中的溶解度顯著(zhù)降低；而且在一定溫度、pH值和離子強度下，引起蛋白質(zhì)沉淀的有機溶劑的濃度不同，因此，控制有機溶劑的。
4.蛋白質(zhì)分離方法有哪些
據蛋白質(zhì)分子大小不同進(jìn)行分離的方法主要有透析、超濾、離心和凝膠過(guò)濾等。
透析和超濾是分離蛋白質(zhì)時(shí)常用的方法。
透析是將待分離的混合物放入半透膜知制成的透析袋中，再浸道入透析液進(jìn)行分離。超濾是利用離心力或壓力強行使水和其它小分子通過(guò)半透膜，而蛋白質(zhì)被截留在半透膜上的過(guò)程。
這兩種方法都可以將蛋白質(zhì)大分子與以無(wú)機回鹽為主的小分子分開(kāi)。
它們經(jīng)常和鹽析、鹽溶方法聯(lián)合使用，在進(jìn)行鹽析或鹽溶后可以利用這兩種方法除去引入的無(wú)機鹽。
由于超濾過(guò)程中，濾膜表面容易被吸附的蛋白質(zhì)堵塞，以致超濾速度減慢，截流物質(zhì)的分子量也越來(lái)越小。所以在使用超濾方法時(shí)要選擇合適的濾膜，也可以選擇切向流過(guò)濾得到更理答想的效果。
5.蛋白質(zhì)分離純化常用的方法
1、沉淀
2、電泳：蛋白質(zhì)在高于或低于其等電點(diǎn)的溶液中是帶電的，在電場(chǎng)中能向電場(chǎng)的正極或負極移動(dòng)。根據支撐物不同，有薄膜電泳、凝膠電泳等。
3、透析：利用透析袋把大分子蛋白質(zhì)與小分子化合物分開(kāi)的方法。
4、層析： a.離子交換層析，利用蛋白質(zhì)的兩性游離性質(zhì)，在某一特定PH時(shí)，各蛋白質(zhì)的電荷量及性質(zhì)不同，故可以通過(guò)離子交換層析得以分離。如陰離子交換層析，含負電量小的蛋白質(zhì)首先被洗脫下來(lái)。 b.分子篩，又稱(chēng)凝膠過(guò)濾。小分子蛋白質(zhì)進(jìn)入孔內，滯留時(shí)間長(cháng)，大分子蛋白質(zhì)不能同時(shí)入孔內而徑直流出。
5、超速離心：既可以用來(lái)分離純化蛋白質(zhì)也可以用作測定蛋白質(zhì)的分子量。不同蛋白質(zhì)其密度與形態(tài)各不相同而分開(kāi)。
6.蛋白質(zhì)分離鑒定的常用方法有哪些
蛋白質(zhì)分離鑒定的常用方法：? 沉淀法 沉淀法也稱(chēng)溶解度法。
其純化生命大分子物質(zhì)的基本原理是根據各種物質(zhì)的結構差異性來(lái)改變溶液的某些性質(zhì)，進(jìn)而導致有效成分的溶解度發(fā)生變化。 1、鹽析法 鹽析法的根據是蛋白質(zhì)在稀鹽溶液中，溶解度會(huì )隨鹽濃度的增高而上升，但當鹽濃度增高到一定數值時(shí)，使水活度降低，進(jìn)而導致蛋白質(zhì)分子表面電荷逐漸被中和，水化膜逐漸被破壞，最終引起蛋白質(zhì)分子間互相凝聚并從溶液中析出。
2、有機溶劑沉淀法 有機溶劑能降低蛋白質(zhì)溶解度的原因有二：其一、與鹽溶液一樣具有脫水作用；其二、有機溶劑的介電常數比水小，導致溶劑的極性減小。 3、蛋白質(zhì)沉淀劑 蛋白質(zhì)沉淀劑僅對一類(lèi)或一種蛋白質(zhì)沉淀起作用，常見(jiàn)的有堿性蛋白質(zhì)、凝集素和重金屬等。
4、聚乙二醇沉淀作用 聚乙二醇和右旋糖酐硫酸鈉等水溶性非離子型聚合物可使蛋白質(zhì)發(fā)生沉淀作用。 5、選擇性沉淀法 根據各種蛋白質(zhì)在不同物理化學(xué)因子作用下穩定性不同的特點(diǎn)，用適當的選擇性沉淀法，即可使雜蛋白變性沉淀，而欲分離的有效成分則存在于溶液中，從而達到純化有效成分的目的。
吸附層析 1、吸附柱層析 吸附柱層析是以固體吸附劑為固定相，以有機溶劑或緩沖液為流動(dòng)相構成柱的一種層析方法。 2、薄層層析 薄層層析是以涂布于玻板或滌綸片等載體上的基質(zhì)為固定相，以液體為流動(dòng)相的一種層析方法。
這種層析方法是把吸附劑等物質(zhì)涂布于載體上形成薄層，然后按紙層析操作進(jìn)行展層。 3、聚酰胺薄膜層析 聚酰胺對極性物質(zhì)的吸附作用是由于它能和被分離物之間形成氫鍵。
這種氫鍵的強弱就決定了被分離物與聚酰胺薄膜之間吸附能力的大小。層析時(shí)，展層劑與被分離物在聚酰胺膜表面競爭形成氫鍵。
因此選擇適當的展層劑使分離在聚酰胺膜表面發(fā)生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的連續過(guò)程，就能導致分離物質(zhì)達到分離目的。 離子交換層析 離子交換層析是在以離子交換劑為固定相，液體為流動(dòng)相的系統中進(jìn)行的。
離子交換劑是由基質(zhì)、電荷基團和反離子構成的。離子交換劑與水溶液中離子或離子化合物的反應主要以離子交換方式進(jìn)行，或借助離子交換劑上電荷基團對溶液中離子或離子化合物的吸附作用進(jìn)行。
凝膠過(guò)濾 凝膠過(guò)濾又叫分子篩層析，其原因是凝膠具有網(wǎng)狀結構，小分子物質(zhì)能進(jìn)入其內部，而大分子物質(zhì)卻被排除在外部。當一混合溶液通過(guò)凝膠過(guò)濾層析柱時(shí)，溶液中的物質(zhì)就按不同分子量篩分開(kāi)了。
親和層析 親和層析的原理與眾所周知的抗原-抗體、激素-受體和酶-底物等特異性反應的機理相類(lèi)似，每對反應物之間都有一定的親和力。正如在酶與底物的反應中，特異的底物（S）才能和一定的酶（E）結合，產(chǎn)生復合物（E-S）一樣。
在親和層析中是特異的配體才能和一定的生命大分子之間具有親和力，并產(chǎn)生復合物。而親和層析與酶-底物反應不同的是，前者進(jìn)行反應時(shí)，配體（類(lèi)似底物）是固相存在；后者進(jìn)行反應時(shí)，底物呈液相存在。
實(shí)質(zhì)上親和層析是把具有識別能力的配體L（對酶的配體可以是類(lèi)似底物、抑制劑或輔基等）以共價(jià)鍵的方式固化到含有活化基團的基質(zhì)M（如活化瓊脂糖等）上，制成親和吸附劑M-L，或者叫做固相載體。而固化后的配體仍保持束縛特異物質(zhì)的能力。
因此，當把固相載體裝人小層析柱（幾毫升到幾十毫升床體積）后，讓欲分離的樣品液通過(guò)該柱。這時(shí)樣品中對配體有親和力的物質(zhì)S就可借助靜電引力、范德瓦爾力，以及結構互補效應等作用吸附到固相載體上，而無(wú)親和力或非特異吸附的物質(zhì)則被起始緩沖液洗滌出來(lái)，并形成了第一個(gè)層析峰。
然后，恰當地改變起始緩沖液的pH值、或增加離子強度、或加入抑制劑等因子，即可把物質(zhì)S從固相載體上解離下來(lái)，并形成了第M個(gè)層析峰。顯然，通過(guò)這一操作程序就可把有效成分與雜質(zhì)滿(mǎn)意地分離開(kāi)。
如果樣品液中存在兩個(gè)以上的物質(zhì)與固相載體具有親和力（其大小有差異）時(shí)，采用選擇性緩沖液進(jìn)行洗脫，也可以將它們分離開(kāi)。用過(guò)的固相載體經(jīng)再生處理后，可以重復使用。
上面介紹的親和層析法亦稱(chēng)特異性配體親和層析法。除此之外，還有一種親和層析法叫通用性配體親和層析法。
這兩種親和層析法相比，前者的配體一般為復雜的生命大分子物質(zhì)（如抗體、受體和酶的類(lèi)似底物等），它具有較強的吸附選擇性和較大的結合力。而后者的配體則一般為簡(jiǎn)單的小分子物質(zhì)（如金屬、染料，以及氨基酸等），它成本低廉、具有較高的吸附容量，通過(guò)改善吸附和脫附條件可提高層析的分辨率。
聚焦層析 聚焦層析也是一種柱層析。因此，它和另外的層析一樣，照例具有流動(dòng)相，其流動(dòng)相為多緩沖劑，固定相為多緩沖交換劑。
聚焦層析原理可以從pH梯度溶液的形成、蛋白質(zhì)的行為和聚焦效應三方面來(lái)闡述。 1、PH梯度溶液的形成 在離子交換層析中，pH梯度溶液的形成是靠梯度混合儀實(shí)現的。
例如，當使用陰離子交換劑進(jìn)行層析時(shí)，制備pH由高到低呈線(xiàn)性變化的梯度溶液的方法是，在梯度儀的混合室中裝高pH溶液，而在另一室裝低pH極限溶液，然后打開(kāi)層析柱的下端出口，讓洗脫液連續不斷地流過(guò)柱體。這時(shí)從柱的上部到下部溶液的。
7.請簡(jiǎn)述可用于蛋白質(zhì)分離純化的四種方法及其原理
樓主，方法很多，我就挑幾個(gè)比較有代表的吧
1.親和層析：利用分子與其配體間特殊的、可逆性的親和結合作用而進(jìn)行分離的一種層析技術(shù)。
原理：將具有特殊結構的親和分子制成固相吸附劑放置在層析柱中，當要被分離的蛋白混合液通過(guò)層析柱時(shí)，與吸附劑具有親和能力的蛋白質(zhì)就會(huì )被吸附而滯留在層析柱中。那些沒(méi)有親和力的蛋白質(zhì)由于不被吸附，直接流出，從而與被分離的蛋白質(zhì)分開(kāi)，然后選用適當的洗脫液， 改變結合條件將被結合的蛋白質(zhì)洗脫下來(lái)。
3.聚丙烯酰胺凝膠電泳：用于分離蛋白質(zhì)和寡糖核苷酸。
作用原理 聚丙烯酰胺凝膠電泳是網(wǎng)狀結構，具有分子篩效應。它有兩種形式：（1）非變性聚丙烯酰胺凝膠，在電泳的過(guò)程中，蛋白質(zhì)能夠保持完整狀態(tài)，并依據蛋白質(zhì)的分子量大小、蛋白質(zhì)的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開(kāi)。
/view/320392.htm
4.鹽析：增加中性鹽濃度使蛋白質(zhì)、氣體、未帶電分子溶解度降低的現象。是蛋白質(zhì)分離純化中經(jīng)常使用的方法，最常用的中性鹽有硫酸銨、硫酸鈉和氯化鈉等。
/view/210139.htm
